[發(fā)明專利]一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011236821.7
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112326854B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮娜;唐慶九;張勁松;劉偉;鄭潔;岳亞文;周帥;馮杰;王金艷
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31287
• 代理人: 張竹梅

本發(fā)明提供了一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，該方法包括以下步驟：(1)樹舌靈芝子實體的預(yù)處理步驟；(2)超高效液相色譜檢測步驟；(3)化合物質(zhì)譜信息獲得步驟；(4)超高效液相色譜?三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用分析方法建立步驟；(5)數(shù)據(jù)分析步驟。本發(fā)明的同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，運用超高效液相色譜?三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用，建立了一種可以痕量檢測樹舌靈芝子實體中6個三萜類化合物的方法，實現(xiàn)了對樹舌靈芝子實體中特定三萜的精確測定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品藥品分析領(lǐng)域，具體的說涉及一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法。

背景技術(shù)

樹舌靈芝，是多孔菌科(Polyporaceae)靈芝屬(Ganoderma sp.)下樹舌亞屬多個種的統(tǒng)稱，常見的樹舌靈芝有Ganoderma lobatum、Ganoderma Applanatum、Ganodermaaustrale等。樹舌靈芝的多個種在民間有藥用歷史，且目前已有少量的人工栽培，但尚缺乏科學(xué)系統(tǒng)的研究。

研究發(fā)現(xiàn)，樹舌靈芝中三萜有樹舌環(huán)氧酸H(Applanoxidic acid H)，樹舌環(huán)氧酸A(Applanoxidic acid A)，樹舌環(huán)氧酸G(Applanoxidic acid G)，樹舌環(huán)氧酸C(Applanoxidic acid C)，樹舌環(huán)氧酸E(Applanoxidic acid E)，樹舌環(huán)氧酸F(Applanoxidic acid F)等樹舌環(huán)氧酸類化合物，種類少但含量高，其具有較強的抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力。

此前，關(guān)于樹舌靈芝中三萜種類和含量的測定，多采用高效液相-紫外檢測法進行初步分析。在同樣條件下，樹舌靈芝中樹舌環(huán)氧酸類三萜化合物與赤芝中靈芝酸、靈芝烯酸類三萜化合物會有相同的保留時間，因此，無法對樹舌靈芝和赤芝中不同的三萜作出準(zhǔn)確區(qū)分。因此，需要建立一種更為精確的檢測樹舌靈芝中樹舌環(huán)氧酸類三萜化合物的分析方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，該方法包括以下步驟：

(1)樹舌靈芝子實體的預(yù)處理步驟：將樹舌靈芝子實體加入有機溶劑超聲提取，取上清液，過濾，得到的濾液即為待測樣品溶液；配制六個樹舌環(huán)氧酸類化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

(2)超高效液相色譜檢測步驟：對待測樣品溶液和六個樹舌環(huán)氧酸類化合物的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液進行超高效液相色譜分離，以獲得較好的分離度；

(3)化合物質(zhì)譜信息獲得步驟：利用質(zhì)譜優(yōu)化軟件(Agilent Optimizer)，對六個樹舌環(huán)氧酸類化合物進行母離子掃描、子離子對的檢出以及最佳碰撞能的尋找；

(4)超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用分析方法建立步驟：在數(shù)據(jù)采集軟件(Agilent MassHunter Data Acquisition)中，在超高效液相色譜分析條件和三重四級桿質(zhì)譜檢測條件下，導(dǎo)入保留時間，母離子、子離子對，建立六個樹舌環(huán)氧酸類化合物的DMRM分析測定方法，同時，對不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液和樣品溶液進行上樣測定；

(5)數(shù)據(jù)分析步驟：運用定量分析軟件(Agilent MassHunter QuantitativeAnalysis)，創(chuàng)建六個樹舌環(huán)氧酸類化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線，對所建方法進行方法學(xué)驗證，并對樹舌靈芝子實體樣品溶液進行定量分析。

優(yōu)選的，步驟(1)中樹舌靈芝子實體的預(yù)處理步驟為：先將樹舌靈芝子實體完全干燥，然后進行浸提，其中浸提的條件為：

所用浸提液為甲醇、乙醇中的一種，優(yōu)選甲醇；

提取方法為超聲提取或60℃加熱提取，優(yōu)選超聲提取；

提取時間為10-90min，優(yōu)選60min；

料液比為1∶20--1∶40(重量g∶體積ml)，優(yōu)選1∶30；