[發明專利]一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法

有效

• 申請號: 202011236821.7
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112326854B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 馮娜;唐慶九;張勁松;劉偉;鄭潔;岳亞文;周帥;馮杰;王金艷
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 上海容慧專利代理事務所(普通合伙) 31287
• 代理人: 張竹梅

1.一種同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，其特征在于該方法包括以下步驟：

(1)樹舌靈芝子實體的預處理步驟：將樹舌靈芝子實體加入有機溶劑超聲提取，取上清液，過濾，得到的濾液即為樣品溶液；配制六個樹舌環氧酸類化合物的混合標準品溶液；

(2)超高效液相色譜檢測步驟：對待測樣品溶液和六個樹舌環氧酸類化合物進行超高效液相色譜分離，以獲得較好的分離度；

(3)化合物質譜信息獲得步驟：利用質譜優化軟件Agilent Optimizer，對六個樹舌環氧酸類化合物進行母離子掃描、子離子對的檢出以及最佳碰撞能的尋找；

(4)超高效液相色譜-三重四級桿質譜聯用分析方法建立步驟：在數據采集軟件Agilent MassHunter Data Acquisition中，在超高效液相色譜分析條件和三重四級桿質譜檢測條件下，導入保留時間，母離子、子離子對，建立六個樹舌環氧酸類化合物的DMRM分析測定方法，同時，對不同濃度的混合標準品溶液和樣品溶液進行上樣測定；

（5）數據分析步驟：運用定量分析軟件Agilent MassHunter Quantitative Analysis，創建六個樹舌環氧酸類化合物的標準曲線，對所建方法進行方法學驗證，并對樹舌靈芝子實體樣品溶液進行定量分析；

其中所述的六種三萜化合物為：樹舌環氧酸H、樹舌環氧酸A、樹舌環氧酸G、樹舌環氧酸C、樹舌環氧酸E和樹舌環氧酸F；

其中步驟（2）中超高效液相色譜分離的色譜條件為：選用Agilent ZORBAX SB-AqC-18，2.1mm×100mm, 1.8μm；檢測波長：252nm；柱溫：30℃；上樣量為5uL；流速：0.3mL/min；流動相：乙腈-0.01%醋酸水；洗脫程序：0-1min，乙腈：20%-20%；1-3min，乙腈：20%-40%；3-12min，乙腈：40%-60%；12-13min，乙腈：60%-100%。

2.根據權利要求1所述的同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，其中通過質譜優化軟件Agilent Optimizer，獲得步驟（3）中分析所需各化合物的保留時間、母離子、子離子對及碰撞能信息如下：

樹舌環氧酸H：保留時間：4.83min；母離子：529.3；定量離子：128.9，碰撞能：21；定性離子：399.2，碰撞能21；

樹舌環氧酸A：保留時間：5.40min；母離子：511.3；定量離子：467.2，碰撞能：29；定性離子：257.0，碰撞能37；

樹舌環氧酸G：保留時間：6.27min；母離子：527.3；定量離子：129.0，碰撞能：33；定性離子：397.1，碰撞能17；

樹舌環氧酸C：保留時間：6.89min；母離子：525.2；定量離子：128.9，碰撞能：13；定性離子：395.2，碰撞能17；

樹舌環氧酸E：保留時間：7.21min；母離子：511.0；定量離子：257.0，碰撞能：37；定性離子：467.2，碰撞能29；

樹舌環氧酸F：保留時間：7.62min；母離子：509.2；定量離子：491.2，碰撞能：17；定性離子：447.1，碰撞能25。

3.根據權利要求1所述的同時檢測樹舌靈芝子實體中六種三萜化合物的方法，其中步驟（4）中，以超高效液相色譜—三重四級桿質譜聯用為分析檢測儀器，其中超高效液相色譜分離的色譜條件為：選用Agilent ZORBAX SB-AqC-18，2.1mm×100mm, 1.8μm；檢測波長：252nm；柱溫：30℃；上樣量為5uL；流速：0.3mL/min；流動相：乙腈-0.01%醋酸水；洗脫程序：0-1min，乙腈：20%-20%；1-3min，乙腈：20%-40%；3-12min，乙腈：40%-60%；12-13min，乙腈：60%-100%；質譜條件為：電噴霧電離源AJS ESI作為離子源，檢測在負離子模式下進行，選用動態多反應監測DMRM，毛細管電壓：3000V，毛細管出口電壓：380V；干燥氣流速：14L/min，干燥氣溫度：200℃，鞘氣溫度：300℃，鞘氣流速：11L/min，噴嘴電壓: 1500V。