[發明專利]檢測心臟損傷早期標志物的多色熒光探針及其制備和使用方法

在審

• 申請號: 202011236376.4
• 申請日: 2020-11-09
• 公開（公告）號: CN112391158A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 廖曉玲;徐文峰;張園園
• 申請（專利權）人: 重慶科技學院
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;C09K11/88;C09K11/58;C09K11/06;B82Y30/00;B82Y40/00;G01N21/64
• 代理公司: 北京元本知識產權代理事務所(普通合伙) 11308
• 代理人: 黎昌莉

1.檢測心臟損傷早期標志物的多色熒光探針，其特征在于，所述多色熒光探針由CdSe/ZnSQDs@AuNCs、心臟損傷早期標志物抗體、熒光染料構成；所述多色熒光探針以CdSe/ZnSQDs@AuNCs為供體及熒光染料為受體的熒光共振能量轉移對；所述CdSe/ZnS QDs︰AuNCs︰熒光染料的體積比為0.5-1︰8-10︰0.1-5。

2.根據權利要求1所述的多色熒光探針，其特征在于，所述CdSe/ZnS QDs︰Au NCs︰熒光染料的體積比為1︰10︰1。

3.根據權利要求1所述的多色熒光探針，其特征在于，所述AuNCs是由谷胱甘肽、同樣包括半胱氨酸、牛血清蛋白、辣根過氧化物酶中一種為模板制備而成。

4.根據權利要求1所述的多色熒光探針，其特征在于，所述心臟損傷早期標志物包括人血中D-二聚體(D-Dimer)、肌鈣蛋白I(cTnI)、肌紅蛋白(MYO)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、C反應蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)中的1種或多種。

5.權利要求1所述的多色熒光探針的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)利用含有羧基或氨基的生物分子為模板合成AuNCs；

(2)利用EDC和NHS混合溶液活化AuNCs得活化AuNCs；

(3)將活化AuNCs加入CdSe/ZnSQDs與AuNCs偶聯得CdSe/ZnSQDs@AuNCs；

(4)將CdSe/ZnSQDs@AuNCs中加入待檢測的對應的心臟損傷早期標志物抗體和熒光染料得心臟損傷早期標志物多色熒光探針。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述含有羧基或氨基的生物分子包括谷胱甘肽、同樣包括半胱氨酸、牛血清蛋白、辣根過氧化物酶中一種。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述EDC和NHS混合溶液與所述AuNCs的體積比為1︰10-1︰25。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中所述CdSe/ZnS QDs與所述活化Au NCs的體積比為1︰5-1︰30。

9.權利要求1所述的多色熒光探針的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)按照硝酸纖維素膜、吸水墊、結合墊、樣品墊的順序依次粘貼在PVC底板上，切成試紙卡；

(2)在所述結合墊噴涂一種或多種所述心臟損傷早期標志物多色熒光探針標記的抗體，在所述NC膜的檢測和質檢線處分別噴涂一種或多種與所述心臟損傷早期標志物多色熒光探針標記的抗體相對應的沒有標記的抗體和抗抗體；

(3)將試紙卡在微流控芯片熒光檢測儀進行檢測；

步驟(1)中各相鄰墊結合部位重合1mm-1.5mm。

10.根據權利要求8所述的使用方法，其特征在于，在進行步驟(3)前取15μL-30μL全血或血清、血漿，與緩沖液和抗凝劑充分混合30s-1min得樣品混合液。