[發明專利]一種NK NK-T細胞的誘導擴增方法

有效

• 申請號: 202011235714.2
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112359015B
• 公開（公告）日: 2023-01-24
• 發明（設計）人: 吳直江;戴懷建;戴小梅
• 申請（專利權）人: 上海映天生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783
• 代理公司: 上海中外企專利代理事務所(特殊普通合伙) 31387
• 代理人: 牛怡

本發明公開了一種CIK2(NK NK?T)細胞的誘導擴增方法，該方法包括免疫細胞CIK2(NK NK?T)的誘導、活化步驟和免疫細胞CIK2(NK NK?T)的大容量培養擴增步驟；還包括免疫細胞CIK2(NK NK?T)的檢定步驟。本發明提供的CIK2(NK NK?T)細胞的誘導擴增方法，可以穩定提高CD16⁺/56⁺CD3^?細胞(NK細胞)和CD16⁺/56⁺CD3⁺細胞(NK樣T細胞)百分比和細胞總體培養擴增的細胞數量。本發明提供的免疫細胞保留了NK細胞較CIK1細胞殺滅腫瘤細胞和病毒感染細胞的功效更強的特點；又彌補了NK細胞的低擴增率，新免疫細胞CIK2也命名為NK NK?T細胞。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是涉及一種CIK2(NK NK-T)細胞的誘導擴增方法。

背景技術

“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)是人外周血分離的淋巴細胞經CD3單克隆抗體、γ-干擾素、白介素-1、白介素-2等細胞因子誘導激活，具有識別和殺傷腫瘤細胞、抑制病毒和調節機體免疫的并能大量培養擴增的免疫細胞，這種活化免疫細胞增殖能力強，主要由NK樣T細胞(CD56⁺CD3⁺)、T(CD3⁺CD8⁺)為主的細胞群體。兼具有T細淋巴細胞的抗腫瘤活性、NK細胞的非MHC限制性殺傷腫瘤的優點。該細胞對多種腫瘤細胞有識別和殺傷作用，而不會傷及體內正常細胞，患者手術或放化療后輸注效果顯著，能消除殘留微小的轉移病灶，常用于放化療、靶向治療無效者，或聯合常規治療提高腫瘤患者生活質量和延長生存期。“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)國家藥監局頒發過臨床研究批件，批件號：2004L02376。

“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)具有顯著的“免疫調節”和體細胞的修復作用。在治療腫瘤的同時，大部分患者尤其是放化療后的患者，出現消化道癥狀減輕或消失，皮膚有光澤，黑斑淡化，靜脈曲張消失，脫發停止甚至頭發生長或局部白發變黑等“年輕化”表現。理論上，NK(CD56⁺CD3^-)細胞殺滅腫瘤和病毒感染細胞的作用更強、更有效，但血液中的NK細胞數量遠低于T細胞數量，“細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)”經培養、活化后，NK細胞含量仍很低。

“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)是一種個體化免疫細胞活化技術，由于個體差異，許多個體的淋巴細胞，活化擴增得到的“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)，其CD16⁺56⁺/CD3⁺細胞(NK樣T細胞)群體達不到理論或預期的要求，即不能穩定地誘導出CD16⁺56⁺/CD3⁺細胞大群體，在臨床上存在個體療效差異。

而NK細胞是“細胞因子誘導的殺傷細胞”(CIK)其中一個亞群，含量較低；如單純誘導、擴增NK細胞，其擴增率低，細胞數量難滿足臨床需求，為滿足臨床需求，目前需發展NK(CD56⁺CD3^-)細胞和NK-T(CD16⁺56⁺/CD3⁺)細胞含量和擴增率高兩者兼顧誘導新方法以解決臨床需求。

發明內容

為克服現有技術的缺陷和不足，本發明旨在提供一種CIK2(NK NK-T)細胞的誘導擴增方法，以穩定提高CD16⁺56⁺/CD3^-細胞(NK細胞)和CD16⁺56⁺/CD3⁺細胞(NK樣T細胞)百分比和細胞總體培養擴增的細胞數量。

為了實現上述目的，根據本發明的第一個方面，提供了一種CIK2(NK NK-T)細胞的誘導擴增方法，該方法包括免疫細胞CIK2(NK NK-T)的誘導、活化步驟和免疫細胞CIK2(NKNK-T)的大容量培養擴增步驟；