[發(fā)明專利]一種通過灌流培養(yǎng)工藝制備腺病毒載體疫苗的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011235524.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-09
• 公開（公告）號(hào): CN112094814B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 肖猛;劉云杰;朱濤;許允立;徐燦;李軍強(qiáng);巢守柏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 康希諾生物股份公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/861;A61K39/00;A61K48/00
• 代理公司: 北京領(lǐng)科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 王立紅;張丹

1.一種腺病毒載體疫苗的制備方法，包括如下的腺病毒宿主細(xì)胞的培養(yǎng)方法的步驟：

（1）接種宿主細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；

（2）細(xì)胞密度達(dá)到1×10⁶個(gè)/mL后開啟灌流，灌流速率為2VVD；

（3）細(xì)胞密度生長至5×10⁶個(gè)/mL后，調(diào)節(jié)灌流速率至3VVD；

其中，所述宿主細(xì)胞為293細(xì)胞；

所述細(xì)胞培養(yǎng)中，谷氨酰胺的濃度維持在2mM以上；

所述細(xì)胞培養(yǎng)的溫度為32-38℃，pH為6.5-7.5，溶氧濃度為30-80%，攪拌速度為30-200rpm；

所述灌流通過利用連續(xù)灌流裝置進(jìn)行，所述連續(xù)灌流裝置采用交替切向流細(xì)胞截留系統(tǒng)。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述截留系統(tǒng)中，中空纖維柱截留孔徑為0.1~0.8μm。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為HEK293細(xì)胞或HEK293.CS細(xì)胞。

4.一種腺病毒載體疫苗的制備方法，包括如下的腺病毒的生產(chǎn)方法的步驟：

（1）接種宿主細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；所述宿主細(xì)胞為293細(xì)胞；

（2）細(xì)胞密度達(dá)到1×10⁶個(gè)/mL后開啟灌流，灌流速率為2VVD；

（3）細(xì)胞密度生長至5×10⁶個(gè)/mL后，調(diào)節(jié)灌流速率至3VVD；

（4）接種病毒，培養(yǎng)；

步驟（4）中，所述培養(yǎng)為灌流培養(yǎng)，灌流速率為1-3VVD；

所述培養(yǎng)中，谷氨酰胺的濃度維持在2mM以上；

所述細(xì)胞培養(yǎng)的溫度為32-38℃，pH為6.5-7.5，溶氧濃度為30-80%，攪拌速度為30-200rpm；

所述灌流通過利用連續(xù)灌流裝置進(jìn)行，所述連續(xù)灌流裝置采用交替切向流細(xì)胞截留系統(tǒng)。

5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述截留系統(tǒng)中，中空纖維柱截留孔徑為0.1~0.8μm。

6.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為HEK293細(xì)胞、HEK293.CS細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒為人腺病毒或黑猩猩腺病毒。

8.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒選自：AdHu5、AdHu4、AdHu7、AdHu11、AdHu26、AdHu55、AdC68、AdC3。

9.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述腺病毒為包含編碼外源基因的重組腺病毒。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述腺病毒包含SARS-CoV-2的結(jié)構(gòu)蛋白基因，所述結(jié)構(gòu)蛋白選自：S蛋白、M蛋白、E蛋白、N蛋白中的一種或多種。