[發(fā)明專利]谷子高葉酸的分子標(biāo)記及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011233178.2
• 申請(qǐng)日: 2020-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN112301045A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張美萍;陜永杰;賀佳星;韓李權(quán);劉永忠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西師范大學(xué);山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/54
• 分類號(hào): C12N15/54;C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 西安銘澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61223
• 代理人: 崔瑞迎

1.一種谷子高葉酸的分子標(biāo)記，其特征在于，所述分子標(biāo)記序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記在鑒定和選育高葉酸含量谷子品種的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述分子標(biāo)記在鑒定和選育高葉酸含量谷子品種的應(yīng)用，其特征在于，用于擴(kuò)增所述分子標(biāo)記的qRT-PCR引物如下：

F-5’-GACCACATCGCCTTCCAT-3’；

R-5’-CCTGATGGACGCTAGTGTTCT-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述分子標(biāo)記在鑒定和選育高葉酸含量谷子品種的應(yīng)用，其特征在于，高葉酸含量谷子品種鑒定方法如下：

步驟1，提取谷子樣品的總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA；

步驟2，以上述cDNA為模板，以谷子18s rRNA為內(nèi)參基因，進(jìn)行qRT-PCR；

內(nèi)參基因引物如下：

F-5’-AAAGTTGGGGGCTCGAAGA C-3’；

R-5’-GGTCGGCATCGTTTATGGTTG-3’；

模板引物如下：

F-5’-GACCACATCGCCTTCCAT-3’

R-5’-CCTGATGGACGCTAGTGTTCT-3’

測定SEQ ID NO.1所示基因表達(dá)量，表達(dá)量高的為高葉酸谷子品種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述分子標(biāo)記在鑒定和選育高葉酸含量谷子品種的應(yīng)用，其特征在于，所述qRT-PCR體系如下：

2×Tip Green qPCR SuperMix 7.5μl，F(xiàn)引物各0.3μl，R引物各0.3μl，Passive Refence DyeI 0.3μl，cDNA 2μl，Nucleas-free water補(bǔ)足15μl；

qRT-PCR反應(yīng)程序如下：

預(yù)變性94℃，1min；變性94℃，10s，60℃退火，20s，延伸72℃，10s，共進(jìn)行40個(gè)循環(huán)；4℃保存。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述分子標(biāo)記在鑒定和選育高葉酸含量谷子品種的應(yīng)用，其特征在于，所述谷子樣品為灌漿中期及后期的谷穗或者葉片。

7.一種包含權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記的重組載體。

8.一種包含權(quán)利要求7所述重組載體的工程菌。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌為農(nóng)桿菌。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的工程菌在構(gòu)建高葉酸含量轉(zhuǎn)基因谷子植株的應(yīng)用。