[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測水華藍(lán)藻拉氏尖頭藻和產(chǎn)擬柱胞藻毒素特異基因的試劑盒及其方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011232085.8 | 申請日： | 2020-11-06 |
| 公開（公告）號： | CN112342279B | 公開（公告）日： | 2022-10-14 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊軍;譚鳳嬌;肖鵬 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院城市環(huán)境研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6851 | 分類號： | C12Q1/6851;C12Q1/689;C12N15/11 |
| 代理公司： | 廈門市精誠新創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 35218 | 代理人： | 秦華 |
| 地址： | 361021 福建*** | 國省代碼： | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 同時(shí) 檢測 藍(lán)藻 尖頭 產(chǎn)擬柱胞藻 毒素 特異 基因 試劑盒 及其 方法 | ||
1.一種同時(shí)檢測水華藍(lán)藻拉氏尖頭藻和產(chǎn)擬柱胞藻毒素特異基因的dPCR檢測方法，其特征在于，所述的方法包括如下步驟：
(1)配置反應(yīng)體系，反應(yīng)體系為，14.5μL的反應(yīng)體積，包括1×dPCR緩沖液7.25μL、rpoC1基因上下游引物各900nM、cyrJ基因上下游引物各900nM、rpoC1基因熒光標(biāo)記TaqMan探針和cyrJ基因熒光標(biāo)記TaqMan探針各200nM、待測樣本的DNA和ddH2O；所述的rpoC1基因上下游引物為SEQ ID No:1-2，所述的cyrJ基因上下游引物為SEQ ID No:3-4，所述的rpoC1基因熒光標(biāo)記TaqMan探針的序列為SEQ ID No:5，所述的cyrJ基因熒光標(biāo)記TaqMan探針的序列為SEQ ID No:6，所述的待測樣本為拉氏尖頭藻；
(2)進(jìn)行dPCR擴(kuò)增，dPCR擴(kuò)增的條件為，預(yù)變性95℃、10min；再按照以下設(shè)定條件PCR擴(kuò)增循環(huán)39次：95℃、30s，58℃、2min；96℃、2min，最后10℃保溫；
(3)讀取熒光信號，根據(jù)熒光信號的平均值分別計(jì)算拉氏尖頭藻特異基因rpoC1和產(chǎn)擬柱胞藻毒素特異基因cyrJ的拷貝數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述的待測樣本的DNA的濃度為每個(gè)反應(yīng)1-104個(gè)拷貝。
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