[發明專利]無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用

在審

• 申請號: 202011229423.2
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112342184A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 趙俊平;王紅;薛紅蘭
• 申請（專利權）人: 江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用，其特征在于，所述卵裂球為8細胞胚胎卵裂球；

所述無鈣鎂離子DPBS包括：氯化鈉5～10g/L、氯化鉀0.1～0.5g/L、磷酸氫二鈉1～1.5g/L、磷酸二氫鉀0.1～0.5g/L、葡萄糖1～2g/L、丙酮酸鈉0.01～0.05g/L、青霉素0.05～0.1g/L、硫酸鏈霉素0.05～0.1g/L、BSA 1～5g/L、4-羥乙基哌嗪乙磺酸3～5g/L，余量為水。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述無鈣鎂離子DPBS包括：氯化鈉8g/L、氯化鉀0.2g/L、磷酸氫二鈉1.15g/L、磷酸二氫鉀0.2g/L、葡萄糖1g/L、丙酮酸鈉0.036g/L、青霉素0.06g/L、硫酸鏈霉素0.05g/L、BSA 3g/L、4-羥乙基哌嗪乙磺酸5g/L，余量為水；

優選地，所述無鈣鎂離子DPBS的pH為7～7.5。

3.一種小鼠8細胞胚胎卵裂球的獲取方法，其特征在于，所述方法包括：

將獲取的8細胞胚胎置于無鈣鎂離子DPBS中孵育，隨后在卵裂球間的透明帶上打孔，完成打孔后將活檢針從打好的空中插入，吸出卵裂球。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述孵育的時間為5～10min。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述打孔采用Piezo系統進行。

6.根據權利要求3-5任一項所述的方法，其特征在于，所述活檢針的孔徑為10～20μm。

7.根據權利要求3-6任一項所述的方法，其特征在于，所述8細胞胚胎置于無鈣鎂離子DPBS中孵育之后，還包括進行酸處理的操作。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述酸處理操作的時間為15～20s。

9.根據權利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述酸處理采用的酸性液滴包括臺氏液；

優選地，所述臺氏液的pH為2～3。

10.根據權利要求3-9任一項所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)將獲取的8細胞胚胎置于無鈣鎂離子DPBS中孵育5～10min，隨后置于pH為2～3的臺氏酸液滴中孵育15～20s；

(2)將酸處理后的8細胞胚胎置于倒置顯微鏡中，采用Piezo系統在卵裂球間的透明帶上打孔，完成打孔后將孔徑為10～20μm的活檢針從打好的空中插入，吸出卵裂球。