[發明專利]無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用

在審

• 申請號: 202011229423.2
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112342184A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 趙俊平;王紅;薛紅蘭
• 申請（專利權）人: 江蘇集萃藥康生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用，用無鈣鎂離子DPBS處理小鼠8細胞胚胎5～10min，削弱了小鼠胚胎卵裂球間的粘性，卵裂球形態微縮，卵周隙明顯變大，在進行卵裂球分割時避免了卵裂球活檢過程中獲取卵裂球操作對其他卵裂球的傷害，胚胎生仔率高，在胚胎活檢技術領域具有重要意義。

技術領域

本發明涉及遺傳學技術領域，尤其涉及無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用。

背景技術

胚胎為多細胞生物由受精卵開始的個體發育過程最初階段的雛體，卵子在受精后形成受精卵，并開始分裂、發育，形成胚胎。先形成的胚胎為桑椹胚，然后形成囊胚，并且植入在子宮內膜中，吸取母體的營養，繼續發育。受精卵發育到桑椹胚這一階段被稱為卵裂期，卵裂期胚胎中的細胞被稱為卵裂球。胚胎移植前基因檢測(preimplantation geneticdiagnosis，PGD)主要應用于臨床為輔助生殖的女性提供胚胎活檢技術，PGD檢測的標本為胚胎卵裂期的1-2個單細胞(卵裂球活檢)或囊胚期的幾個滋養層細胞(囊胚活檢)，用來排除可能攜帶有遺傳疾病的胚胎，選擇無遺傳疾病的胚胎移入子宮可以有效地防止有遺傳疾病的嬰兒出生。胚胎分割技術是用人工方法將一個植入前胚胎分割成兩個或多個部分，如在卵裂期的卵裂球間分割或將桑椹胚分割，移植后獲得同卵雙胎或多胎，被廣泛用于動物育種、發育遺傳學、生理學等領域。胚胎發育過程中卵裂球間的致密化，即卵裂球間連接比較緊密，往往會給PGD檢測以及胚胎分割操作帶來一定困難。

為了解決由于卵裂球間緊密連接而引起的操作困難問題，現有技術中通常采用無Ca²⁺-Mg²⁺的平衡鹽溶液處理，使卵裂球之間連接易于松散，從而利于操作。

無Ca²⁺-Mg²⁺的PBS溶液常被用于PGD檢測和胚胎分割。張敏敏等在激光法活檢對小鼠體外受精胚胎后期發育的影響的研究中，將4細胞和8細胞鼠胚放入無Ca²⁺-Mg²⁺的PBS溶液中平衡5min，使胚胎中細胞間連接松散，以便于吸出卵裂球(張敏敏、章志國、周平等，激光法活檢對小鼠體外受精胚胎后期發育的影響[J]；安徽醫科大學學報，2008，43(001)：13-15.)。韓永勝等在對奶牛的胚胎分割研究中將桑椹胚移入無Ca²⁺-Mg²⁺的PBS溶液中預處理20min，以便于分割操作(韓永勝、佟桂芝、付龍，不同分割液對奶牛不同階段胚胎分割效果的影響[J]；中國畜牧獸醫，2009，36(007)：122-124.)。

也有研究報道將無Ca²⁺-Mg²⁺的HEPES溶液和無Ca²⁺-Mg²⁺的DPBS溶液用于促進卵裂球之間松散。張賓等在對綿羊體外胚分割研究中將桑葚胚移入無Ca²⁺-Mg²⁺的D-PBS溶液中預處理20min，以降低細胞的連接(張賓、石國慶、唐紅，胚胎分割液及分割方法對綿羊體外胚分割效果的影響[J]；新疆農業大學學報，2009，32(04)：41-45.)。李剛在胚胎植入前遺傳學診斷的基礎及臨床應用研究中將6-10細胞期人胚胎置于無Ca²⁺-Mg²⁺的HEPES溶液中處理，以便于后續檢測操作(李剛，胚胎植入前遺傳學診斷的基礎及臨床應用研究[D]；鄭州大學，2006.)。

可見現有技術中并沒有公開將無Ca²⁺-Mg²⁺的DPBS溶液用于卵裂球活檢及卵裂球分割，驗證低成本的無Ca²⁺-Mg²⁺的DPBS溶液能否適用于卵裂球活檢及卵裂球分割，已成為目前亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供了無鈣鎂離子DPBS在小鼠胚胎卵裂球活檢中的應用，所述無鈣鎂離子DPBS可以削弱小鼠胚胎卵裂球間的粘性，避免了獲取卵裂球操作對其他卵裂球的傷害，提高了胚胎生仔率。