[發明專利]一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒

在審

• 申請號: 202011227675.1
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112501155A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 曾小康;肖強;姚婕
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學順德醫院（佛山市順德區第一人民醫院）
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉俊文

本發明公開了一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，包括：組織裂解液、蛋白酶K、結合液、吸附微球、洗滌液、洗脫液，所述吸附微球為直徑50～100μm的二氧化硅微球。與傳統的試劑盒相比，本發明試劑盒價格低廉、操作步驟少、提取純度高，所使用的試劑無毒害且安全穩定，適合用于大批量提取小鼠尾尖及腳趾DNA。還公開了使用上述試劑盒進行小鼠組織基因組DNA的高通量提取的方法。所提供的提取方法簡化了操作流程、縮短了實驗時間，所提取的DNA質量完全滿足后續PCR的要求。顯著提高轉基因小鼠基因鑒定的效率。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別涉及一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒。

背景技術

隨著基因編輯技術發展成熟，轉基因小鼠應運而生，目前國內外許多學者已經利用轉基因小鼠開展研究工作。隨著轉基因技術的迅猛發展，轉基因小鼠價格不再昂貴。因此，國內許多實驗室轉基因小鼠的品系和數量逐漸增加。而純合子轉基因小鼠的獲得需要通過雜合子親代雜交，所以轉基因小鼠的基因鑒定工作——包括DNA提取和PCR擴增——就變成了乏味的重復性工作。

傳統的DNA提取方法包括酚/氯仿提取法和磁珠吸附法等。這些方法雖然能夠獲得較高純度的組織DNA，但是具有操作步驟多、使用試劑量大、成本高等缺點，并且使用的試劑可能存在揮發性大、對人體有毒害作用的問題。例如現有技術中提供了一種可應用于從動物組織中高通量提取基因組DNA的試劑盒及提取方法，該技術使用的裂解液成分包括異硫氰酸胍、Triton-100等對人體危害較大的試劑。另一份現有技術中，其結合液同樣使用了異硫氰酸胍，也會對使用者帶來危害。此外，部分現有技術的結合液包括PEG 8000和異丙醇，還添加了Brij58。Brij58是一種表面活性劑，不僅價格高，使用后還需要經過特殊處理才能排放，否則會污染環境。最重要的是，部分較新的技術方案使用的磁珠為商業化帶有磁性的吸附微球，價格昂貴；又或者使用納米二氧化硅微球作為吸附DNA的載體，使用的微球為納米級別(5～100nm)，制備難度大，成本同樣高昂。因此，急需開發簡便、經濟、通量高的DNA提取方法。

發明內容

本發明公開了一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，以解決現有技術中所存在的一個或多個技術問題，至少提供一種有益的選擇或創造條件。

一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，包括：組織裂解液、蛋白酶K、結合液、吸附微球、洗滌液、洗脫液，所述吸附微球為直徑50～100μm的二氧化硅微球。

進一步，所述裂解液主要由以下成分組成：0.5～2％SDS、0.1～1M NaCl、0.01～0.5M Tris-HCl、0.05～0.1M EDTA，pH值8.0。本試劑盒為保護操作人員，其裂解液中不含有異硫氰酸胍、Triton-100等對人體危害較大的試劑。

進一步，所述結合液主要由以下成分組成：1～1.5M NaCl、70～80％異丙醇，5～8％PEG 8000，pH值7.0。PEG 8000具有分散微球的作用，異丙醇則起到促進DNA結合作用，從而使得結合液具有更好的結合效果。

進一步，所述二氧化硅微球的濃度為0.4～0.6g/ml，pH值7.5。使用常規二氧化硅粉末(200～300目)自制的微球，成本非常低廉，提取1000個樣品所需的微球成本約為10元。二氧化硅的原料來源廣泛，常規的銷售渠道均能獲取，特別適合用于批量提取轉基因小鼠組織DNA。

進一步，所述洗滌液主要由以下成分組成：10～15mM Tris、70～75％乙醇，pH值8.0。本試劑盒的洗滌液只需一步洗滌即可滿足檢測要求，節約時間，適合批量化的提取工作。

進一步，所述洗脫液為超純水，pH值8.0。

另一方面，本發明公開了使用上述試劑盒進行小鼠組織基因組DNA的高通量提取的方法。包括以下步驟：