[發明專利]一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒

在審

• 申請號: 202011227675.1
• 申請日: 2020-11-06
• 公開（公告）號: CN112501155A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 曾小康;肖強;姚婕
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學順德醫院（佛山市順德區第一人民醫院）
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 劉俊文

1.一種應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，包括：組織裂解液、蛋白酶K、結合液、吸附微球、洗滌液、洗脫液，所述吸附微球為直徑50～100μm的二氧化硅微球。

2.根據權利要求1所述的應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，所述裂解液主要由以下成分組成：0.5～2％SDS、0.1～1M NaCl、0.01～0.5M Tris-HCl、0.05～0.1M EDTA；優選地，所述裂解液的pH為8.0。

3.根據權利要求1所述的應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，所述結合液主要由以下成分組成：1～1.5M NaCl、70～80％異丙醇，5～8％PEG 8000；優選地，所述結合液的pH為7.0。

4.根據權利要求1所述的應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，所述二氧化硅微球的濃度為0.4～0.6g/ml，pH為7.5。

5.根據權利要求1所述的應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，所述洗滌液主要由以下成分組成：10～15mM Tris、70～75％乙醇；優選地，所述洗滌液的pH為8.0。

6.根據權利要求1所述的應用于轉基因小鼠基因鑒定的DNA提取試劑盒，其特征在于，所述洗脫液為超純水，pH值8.0。

7.一種小鼠組織基因組DNA的高通量提取方法，其特征在于，使用如權利要求1至6任一項所述的試劑盒按如下步驟進行提取：

(1)裂解組織：取樣本0.5～1g置于離心管中，5000rpm離心5min，然后加入裂解液100μl、蛋白酶K 150～200μg，于50～60℃水浴中裂解4～6h，得到混合液A；

(2)結合：向混合液A加入100～200μl結合液和10～20μl吸附微球，充分震蕩混勻，置于室溫靜置30～60min，得到混合液B；

(3)洗滌：向混合液B加入洗滌液600～800μl，充分震蕩混勻，5000rpm離心1min，棄去上清液，置于90℃金屬浴中加熱3～5min，待乙醇揮發完全，得到沉淀物C；

(4)洗脫：向沉淀物C加入預熱的洗脫液50～100μl，振蕩混勻，室溫靜置10min，然后13000rpm離心5min，取上清即可。