[發明專利]一種與肝臟損傷相關的ERO1α啟動子區甲基化分子標志物的篩選方法及其應用

在審

• 申請號: 202011226556.4
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN112501276A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 姜怡鄧;張慧萍;徐龍;張輝;焦運;吳欣妍;馬芳;劉圓
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6809
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 程華

1.一種與肝臟損傷相關的ERO1α啟動子區甲基化分子標志物的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)構建CBS^+/-基因敲除小鼠高同型半胱氨酸血癥模型，Hcy干預肝細胞體外模擬高同型半胱氨酸血癥；

(2)使用nMS-PCR檢測CBS^+/-高同型半胱氨酸血癥小鼠肝臟中ERO1α甲基化狀態，以及使用MassArray甲基化分析檢測Hcy干預肝細胞后ERO1α的啟動子區的甲基化位點；

(3)熒光素酶檢測ERO1α的啟動子區活性位置；

(4)使用qRT-PCR和western blot檢測DNMTs的表達以及對ERO1α的調控；

(5)干擾或過表達DNMT1后檢測ERO1α的表達以及MassArray甲基化分析檢測ERO1α啟動子區的甲基化狀態；

(6)在動物和細胞水平檢測H3K9的表達水平；使用CHIP檢測ERO1α啟動子區的H3K9me2水平；

(7)動物和細胞水平檢測G9a的表達，過表達或敲低G9a后，CHIP檢測ERO1α啟動子區的H3K9me2水平；

(8)分析比較ERO1α啟動子區甲基化的檢測靈敏度與目前肝臟損傷中的檢測方法進行比較，ERO1α啟動子區甲基化的位點改變作為更加敏感的診斷指標在HHcy誘導的肝損傷中發揮重要的作用，更早的檢測HHcy誘導的肝損傷。

2.根據權利要求1所述的與肝臟損傷相關的ERO1α啟動子區甲基化分子標志物的篩選方法，其特征在于，在CBS^+/-基因敲除小鼠中，與正常組相比，HHcy肝臟組織中ERO1α的啟動子區呈現高甲基化主要的位置在-1100bp-1bp，在體外Hcy干預的肝細胞中得到了相同的趨勢。

3.一種權利要求1所述篩選方法得到的ERO1α啟動子區甲基化分子標志物在診斷HHcy致肝損傷的試劑制備過程中的應用。