[發(fā)明專利]一種大櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快速繁殖方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011224241.6
• 申請(qǐng)日: 2020-11-05
• 公開（公告）號(hào): CN112293255B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高小霞;張森;梁建軍;童耀宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西果業(yè)集團(tuán)楊凌種苗科技有限公司
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明提供了一種大櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括外植體消毒建立、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽馴化步驟，本發(fā)明改良了常用的MS培養(yǎng)基，降低了硝酸鉀的含量，同時(shí)增加了四水硝酸鈣和硫酸鉀，直接解決了櫻桃組培苗在生產(chǎn)過(guò)程中莖尖壞死的問(wèn)題。本發(fā)明簡(jiǎn)化了移栽步驟，提高了生根率和移栽成活率，降低苗木生產(chǎn)成本至70％，進(jìn)一步提高苗木質(zhì)量以滿足市場(chǎng)需求，同時(shí)為未來(lái)櫻桃脫毒苗木繁育、種質(zhì)資源保存以及利用基因技術(shù)對(duì)櫻桃進(jìn)行遺傳改良提供理論依據(jù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物人工繁殖技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種大櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)

大櫻桃是薔薇科李屬櫻桃亞屬果樹，其果實(shí)酸甜，富含多種維生素、微量元素等，食用價(jià)值較高，近些年來(lái)備受人們喜歡，市場(chǎng)上供不應(yīng)求。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有繁殖速度快、不受季節(jié)影響等優(yōu)點(diǎn)，可顯著縮短育苗周期，能在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的優(yōu)質(zhì)苗木。現(xiàn)有技術(shù)通過(guò)矮砧密植的方式可實(shí)現(xiàn)大櫻桃果樹早掛果、早豐產(chǎn)，推廣大櫻桃矮砧密植核心技術(shù)要選擇好砧木。經(jīng)過(guò)多年的區(qū)域與生產(chǎn)試驗(yàn)觀察，吉塞拉6號(hào)與大多數(shù)大櫻桃嫁接親和性較好，也具有明顯的早果性、早豐產(chǎn)、抗病、抗?jié)?、土壤適應(yīng)范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，是推廣大櫻桃矮砧密植不可多得的優(yōu)良砧木。吉塞拉6號(hào)是三倍體無(wú)性系砧木，不能用種子繁殖，傳統(tǒng)的繁殖方式是壓條、根孽和扦插，但存在繁殖速度慢，生長(zhǎng)不一致的問(wèn)題，不能及時(shí)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)的砧木苗，不能滿足生產(chǎn)需要。目前吉塞拉6號(hào)在組織培養(yǎng)繁殖的過(guò)程中因培養(yǎng)基配方不合理導(dǎo)致生產(chǎn)中出現(xiàn)瓶苗玻璃化、生根率低、移栽成活率低等問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述背景技術(shù)的闡述，本發(fā)明提供一種大櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快速繁殖方法，所解決的技術(shù)問(wèn)題是解決吉塞拉6號(hào)在組織培養(yǎng)快速繁殖過(guò)程中存在的玻璃化、植株莖尖壞死、生長(zhǎng)瘦弱、生根率低和移栽成活率低的問(wèn)題。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種大櫻桃砧木吉塞拉6號(hào)組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：

步驟一、外植體消毒建立：在春季4月中旬至5月中旬，選取生長(zhǎng)健壯無(wú)病蟲害的當(dāng)年生吉塞拉6號(hào)砧木枝條，剪成2-3cm左右的單芽莖段，將莖段用洗潔精清洗2min，流水沖洗2h；后在超凈工作臺(tái)中操作，將所用的器皿與工具進(jìn)行高溫高壓滅菌；用鑷子將莖段轉(zhuǎn)移至無(wú)菌瓶中，倒入75％的酒精，使用酒精消毒10-15s后快速倒出，無(wú)菌水清洗3遍，接著用濃度為1g/L的升汞殺菌消毒6-8min，同時(shí)要加1-2滴吐溫20，而后倒出升汞用無(wú)菌水清洗6遍，每次清洗要不斷晃動(dòng)，以使清洗徹底，得到外植體；

步驟二、初代培養(yǎng)：外植體切去莖段與升汞接觸的上下端傷口，剝掉葉柄，垂直接入初代培養(yǎng)基中，每瓶放2個(gè)，然后放入培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件溫度24±2℃，光照強(qiáng)度為4000Lux，光周期為白天/黑暗＝16h/8h，生長(zhǎng)周期為4周；

步驟三、繼代培養(yǎng)，初代培養(yǎng)4周后的外植體，剪取莖段萌發(fā)出的1.5-2cm左右的新芽，轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，擴(kuò)大組培苗量，培養(yǎng)條件與初代培養(yǎng)相同，生長(zhǎng)周期為4周，增殖系數(shù)在3-4之間；

步驟四、生根培養(yǎng)：在增殖苗中選取生長(zhǎng)健壯、高度在2-2.5cm之間的植株，剪去基部葉片，垂直接入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；培養(yǎng)條件是溫度22±2℃，光照強(qiáng)度為2000-3000Lux，光周期為白天/黑暗＝16h/8h，生長(zhǎng)周期為2周；

步驟五、移栽馴化：生根培養(yǎng)2周后組培苗的根系達(dá)1cm后，進(jìn)行移栽馴化，所述移栽馴化的基質(zhì)配比為泥炭：椰糠：珍珠巖＝12:5:3；將配好的基質(zhì)裝入50孔林木穴盤中待用，將已生根的植株從瓶?jī)?nèi)拿出，清水中洗去培養(yǎng)基，將整顆植株在1000倍的多菌靈中泡5s，垂直栽入準(zhǔn)備好的基質(zhì)中，放入預(yù)先準(zhǔn)備的小拱棚開始馴化，馴化期間要注意適當(dāng)通風(fēng)，馴化前1周要保證空氣濕度在90％以上，溫度在24-26℃之間，1周后有新根發(fā)出，隨后溫度與濕度要求逐漸降低，3周后便可去掉塑料膜，移入硬化室進(jìn)行快速生長(zhǎng)及木質(zhì)化鍛煉。