[發明專利]一種大櫻桃砧木吉塞拉6號組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 202011224241.6
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN112293255B
• 公開（公告）日: 2023-07-18
• 發明（設計）人: 高小霞;張森;梁建軍;童耀宏
• 申請（專利權）人: 陜西果業集團楊凌種苗科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 邢江峰

1.一種大櫻桃砧木吉塞拉6號組織培養快速繁殖方法，具體步驟如下：

步驟一、外植體消毒建立：在春季4月中旬至5月中旬，選取生長健壯無病蟲害的當年生吉塞拉6號砧木枝條，剪成2-3cm的單芽莖段，將莖段用洗潔精清洗2min，流水沖洗2h；在超凈工作臺中操作，將所用的器皿與工具進行高溫高壓滅菌；用鑷子將莖段轉移至無菌瓶中，倒入75%的酒精，使用酒精消毒10-15s后快速倒出，無菌水清洗3遍，接著用濃度為1g/L的升汞殺菌消毒6-8min，同時要加1-2滴吐溫20，而后倒出升汞用無菌水清洗6遍，每次清洗要不斷晃動，以使清洗徹底，得到消毒外植體；

步驟二、初代培養：外植體切去莖段與升汞接觸的上下端傷口，剝掉葉柄，垂直接入初代培養基中，每瓶放2個，然后放入培養室中進行培養，培養條件溫度24±2℃，光照強度為4000Lux，光周期為白天/黑暗=16h/8h，生長周期為4周；

步驟三、繼代培養：初代培養4周后的外植體，剪取莖段萌發出的1.5-2cm的新芽，轉接至繼代培養上進行增殖培養，擴大組培苗量，培養條件與初代培養相同，生長周期為4周，增殖系數在3-4之間；

步驟四、生根培養：在增殖苗中選取生長健壯、高度在2-2.5cm之間的植株，剪去基部葉片，垂直接入生根培養基中進行生根培養；培養條件是溫度22±2℃，光照強度為2000-3000Lux，光周期為白天/黑暗=16h/8h，生長周期為2周；

步驟五、移栽馴化：生根培養2周后組培苗的根系達1cm后，進行移栽馴化，所述移栽馴化的基質配比為泥炭：椰糠：珍珠巖=12:5:3；將配好的基質裝入50孔林木穴盤中待用，將已生根的植株從瓶內拿出，清水中洗去培養基，將整顆植株在1000倍的多菌靈中浸泡5s，垂直栽入準備好的基質中，放入預先準備的小拱棚開始馴化，馴化期間要注意適當通風，馴化前1周要保證空氣濕度在90%以上，溫度在24-26℃之間，1周后新根發出，隨后溫度與濕度要求逐漸降低，3周后便可去掉塑料膜，移入硬化室進行快速生長及木質化鍛煉；

馴化期間噴施稀釋殺菌劑和殺蟲劑預防病蟲害；

所述殺菌劑為甲托、瑞苗清、多菌靈和四霉素，所述殺蟲劑為吡蟲啉、溴氰菊酯，氯氰菊酯、噠螨靈；

所述初代培養基為改良MS培養基、0.5-0.8mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.06-0.1mg/L的吲哚丁酸、30g/L的蔗糖和6g/L的瓊脂，氫離子濃度指數為5.8-6.0，瓊脂強度為1300kg/cm²，初代培養基在121℃條件下，滅菌20min；

所述繼代培養基為改良MS培養基、0.8-1mg/L的6-芐氨基腺嘌呤、0.02-0.06mg/L的吲哚丁酸、30g/L的蔗糖和6g/L的瓊脂，氫離子濃度指數值為5.8-6.0，瓊脂強度為1300kg/cm2，繼代培養基在121℃條件下，滅菌20min；

所述改良MS培養基由大量元素、微量元素和有機物組成，大量元素為硝酸銨1650mg/L、硝酸鉀950mg/L、七水硫酸鎂370mg/L、磷酸二氫鉀170mg/L、四水硝酸鈣980mg/L、硫酸鉀780mg/L、二水氯化鈣440mg/L；微量元素為一水硫酸錳16.9mg/L、七水硫酸鋅8.6mg/L、硼酸6.2mg/L、碘化鉀0.83mg/L、五水硫酸銅0.025mg/L、六水氯化鈷0.025mg/L、EDDHA螯合鐵100mg/L和二水鉬酸鈉0.25mg/L，有機物為甘氨酸2mg/L、吡多素0.5mg/L、煙酸0.5mg/L、硫胺素0.1mg/L和肌醇100mg/L；

所述生根培養基為上述改良MS培養基中的大量元素的含量減半，微量元素的含量與有機物的含量保持不變，還包括0.2-0.5mg/L的吲哚丁酸和0.5-1mg/L的萘乙酸，蔗糖含量為20g/L，瓊脂含量為6g/L，氫離子濃度指數值為5.8-6.0，瓊脂強度為1300kg/cm2，生根培養基在121℃條件下，滅菌20min。