[發(fā)明專利]一種司美格魯肽的合成方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011221694.3 | 申請日： | 2020-11-05 |
| 公開（公告）號： | CN112321699B | 公開（公告）日： | 2021-09-14 |
| 發(fā)明（設計）人： | 馬亞平;戴政清;張凌云;王宇恩;付信;周迎春;王慶磊 | 申請（專利權(quán)）人： | 深圳深創(chuàng)生物藥業(yè)有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/605 | 分類號： | C07K14/605;C07K1/10;C07K1/04;C07K1/06 |
| 代理公司： | 北京市誠輝律師事務所 11430 | 代理人： | 范盈 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市南山區(qū)粵海街道大沖*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 美格 合成 方法 | ||
1.一種司美格魯肽的合成方法，其特征在于，把離子液體作為一種親水性的Linker偶聯(lián)到固相樹脂上，然后通過固相合成法依次連接司美格魯肽序列中相對應的氨基酸，裂解、純化，得到司美格魯肽精肽；
其包括如下步驟：
(1)把離子液體Linker偶聯(lián)到固相樹脂上；
(2)根據(jù)司美格魯肽C-末端的第一個氨基酸Gly，把Fmoc-Gly-OH偶聯(lián)到上述含有離子液體Linker的固相樹脂上；
(3)脫除Fmoc保護基，根據(jù)司美格魯肽的序列，按照偶聯(lián)Fmoc或Boc保護α氨基的氨基酸或肽段，然后脫除Fmoc保護基的方法依次進行偶聯(lián)，F(xiàn)moc或Boc保護α氨基的氨基酸的偶聯(lián)順序為：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH；
(4)脫除Lys(Alloc)中的Alloc保護基團；
(5)根據(jù)司美格魯肽的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，偶聯(lián)Fmoc-AEEA-OH，脫除Fmoc保護基，然后依次偶聯(lián)Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu-OtBu和十八烷二酸單叔丁酯；
(6)裂解樹脂和側(cè)鏈保護基得到粗肽；
(7)純化后得到司美格魯肽精肽；
其中，離子液體選自咪唑基類型的離子液體；所述咪唑基類型的離子液體包括1-(2-羥基乙基)咪唑四氟硼酸離子液體、1-(2-羥基乙基)咪唑六氟磷酸離子液體、1-(2-羥基乙基)咪唑三氟甲磺酸離子液體、1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑六氟磷酸離子液體、1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑四氟硼酸離子液體、1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑三氟甲磺酸離子液體、1-(2-羥基乙基)咪唑雙三氟甲基磺酰亞胺液體、1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑雙三氟甲基磺酰亞胺離子液體中的一種；
所述步驟(6)中裂解采用的裂解試劑為TFA、TIS、EDT、PhOH、H2O的混合溶液，體積比為TFA：TIS：EDT：PhOH：H2O＝90:3:3:2:2，裂解時間為1.5-3.5小時。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的所述的司美格魯肽的合成方法，其特征在于，把離子液體Linker偶聯(lián)到固相樹脂上包括以下步驟：步驟一、將1-(2-羥基乙基)咪唑或1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑和異丁烯反應萃取結(jié)晶后，得到叔丁基保護的1-(2-羥基乙基)咪唑或1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑；步驟二、然后將固相樹脂加入，在N-甲基吡咯烷酮中，80℃反應24小時，抽濾，用DCM清洗固相樹脂，然后加入25％TFA的DCM溶劑，室溫下反應2小時，得到脫除叔丁基保護的1-(2-羥基乙基)咪唑固相樹脂或脫除叔丁基保護的1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑固相樹脂；步驟三、將脫除叔丁基保護的1-(2-羥基乙基)咪唑固相樹脂或脫除叔丁基保護的1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑固相樹脂分別與四氟硼酸鈉、六氟磷酸鈉、三氟甲磺酸鈉、雙三氟甲基磺酰亞胺鋰，通過陰離子交換樹脂，得到相應的以1-(2-羥基乙基)咪唑或1-(3-羥基丙基)-1H-咪唑離子液體為Linker的固相樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的合成司美格魯肽的方法，其特征在于，所述固相樹脂選自Merrifield樹脂、2CTC樹脂或Wang樹脂。
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