[發明專利]一種β-葡糖腦苷脂酶活性的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011220020.1
• 申請日: 2020-11-05
• 公開（公告）號: CN112301093A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 王永凱;馬蒙蒙;唐贊;王瑞;劉立明;盧孟孟;孫杰;胖鐵良;李建中
• 申請（專利權）人: 諾道中科（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/34
• 分類號: C12Q1/34
• 代理公司: 北京盛詢知識產權代理有限公司 11901
• 代理人: 張海青

本發明公開了一種β?葡糖腦苷脂酶活性的檢測試劑盒，屬于生化檢測領域，該檢測試劑盒包括反應液、沉淀劑、終止液、線性標準品、對照品，其中，所述線性標準品為4?甲基傘形酮溶液，所述反應液為4?甲基傘形酮酰?β?D?葡糖腦苷脂溶液；該試劑盒可以快速、準確進行人體血液樣本中β?葡糖腦苷脂酶活性的體外檢測，通過對采集的濾紙干血片樣本或靜脈血樣本進行檢測，可實現批量化快速、便捷、準確輔助診斷戈謝病患者的目的，該試劑盒檢測靈敏度高、選擇性好、抗干擾能力強、可重現性好、操作簡便，產品穩定性好，易于臨床使用。

技術領域

本發明涉及生化檢測領域，特別是涉及一種β-葡糖腦苷脂酶活性的檢測試劑盒。

背景技術

戈謝病(GD)即葡糖腦苷脂病，是一種家族性糖脂代謝疾病，為染色體隱性遺傳，是溶酶體沉積病中最常見的一種。葡糖腦苷脂是一種可溶性的糖脂類物質，是細胞的組成成分之一，在人體內廣泛存在。由于葡糖腦苷脂酶的缺乏而引起葡糖腦苷脂在肝、脾、骨骼和中樞神經系統的單核-巨噬細胞內蓄積而發病，產生相應的臨床表現。戈謝病在世界各地均有發病。猶太人群發病率較高。我國在1948年首次報道以來，各地均有報告，尤其河北、山東、河南及遼寧病例報告較多。

戈謝病為常染色體隱性遺傳，致病基因位于1號染色體。目前發現位于染色體1q21的GBA基因點突變。GBA基因可見到錯義突變、剪接突變、轉移突變、基因缺失、基因與假基因融合等，導致葡糖腦苷脂酶的催化功能和穩定性下降，使大量的葡糖腦苷脂在肝、脾、骨骼、肺和腦組織的單核-巨噬細胞中蓄積，形成典型的戈謝細胞。不同的人種基因型的變異不同。少數患者可能為激活蛋白缺陷。

葡糖腦苷脂酶是一種溶酶體酶，催化D-葡糖-N-酰基鞘氨醇水解，反應生成D-葡萄糖和N-酰基鞘氨醇。戈謝病是一種常染色體隱性遺傳性疾病，是由于編碼β-葡萄糖腦苷脂酶(GBA)的基因缺陷導致機體葡萄糖腦苷脂酶活性缺乏，造成其底物葡萄糖腦苷脂在肝、脾、骨骼、肺，甚至腦的巨噬細胞溶酶體中貯積而產生的疾病。

目前，國內臨床上診斷戈謝病暫無快速、便捷的診斷試劑產品，通常主要通過基因的突變檢測、CT、X線等手段結合典型臨床癥狀如面容改變、皮膚粗糙、關節變形、臟器受累等進行診斷。但針對缺乏典型臨床癥狀的患者，上述手段均不能有效達到早期診斷的目的，且存在操作復雜、費用昂貴、多次反復對患者二次傷害的弊端，也不能作為一種更直接的診斷標準進行該疾病的診斷。

發明內容

本發明的目的是提供一種β-葡糖腦苷脂酶活性的檢測試劑盒，以解決上述現有技術存在的問題，該試劑盒通過測定濾紙干血片血液樣本或靜脈血液樣本中β-葡糖腦苷脂酶活性，輔助診斷戈謝病患者，具有微量、快速、便捷的特點，解決了目前暫無同類成熟檢測試劑盒產品使用的問題。

為實現上述目的，本發明提供了如下方案：

本發明提供一種β-葡糖腦苷脂酶活性的檢測試劑盒，包括反應液、沉淀劑、終止液、線性標準品、對照品，其中，所述線性標準品為4-甲基傘形酮溶液，所述反應液為4-甲基傘形酮酰-β-D-葡糖腦苷脂溶液。

進一步地，所述4-甲基傘形酮酰-β-D-葡糖腦苷脂溶液為酸性溶液，由緩沖液調節pH。

進一步地，所述4-甲基傘形酮酰-β-D-葡糖腦苷脂溶液的pH為4.0～6.0；

所述緩沖液為選自醋酸-醋酸鈉緩沖液、PBS緩沖液、Goods緩沖液、tris緩沖液、檸檬酸鈉-磷酸氫二鉀緩沖液、mops緩沖液、磷酸二氫鉀-磷酸氫二鉀緩沖液、pipes緩沖液和hepes緩沖液中的至少一種。

進一步地，所述反應液的制備方法為：4-甲基傘形酮酰-β-D-葡糖腦苷脂10mmol加入到純化水中攪拌充分溶解，加入緩沖液調節溶液的pH為4.0～6.0，定容至1000mL。

進一步地，所述線性標準品的濃度包括40nmol/L、100nmol/L、200nmol/L、400nmol/L和500nmol/L。