[發明專利]一種抗體生產細胞的凍存制劑、其應用及凍存方法

在審

• 申請號: 202011217204.2
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN114431221A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 趙騰;沈毅珺;史文磊;楊彤
• 申請（專利權）人: 上海復旦張江生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

本發明公開了一種抗體生產細胞的凍存制劑、其應用及凍存方法。所述凍存制劑包含8?10％(v/v)的DMSO、0.1?0.3％(w/v)的羧甲基纖維素和/或其鹽。本發明所述凍存制劑的成分簡單、易于實現，并具有較好的普適性，利用本發明所述的凍存制劑和凍存方法可以大幅提高長期凍存的抗體生產細胞的復蘇活率。

技術領域

本發明應用于生物技術領域，具體涉及一種抗體生產細胞的凍存制劑、其應用及凍存方法。

背景技術

單克隆抗體(mAb)和Fc融合蛋白已經成為廣泛應用于臨床治療自身免疫性疾病和腫瘤的主流藥物。哺乳動物細胞是治療性蛋白的優選生產宿主，由于其能夠生成具有翻譯后修飾的單克隆抗體，這對于生物有效性和安全性是必不可少的。自1987年第一個哺乳動物表達的治療蛋白由中國倉鼠卵巢(CHO)細胞生產以來，CHO細胞一直在該市場中占有很大份額。最近幾十年，CHO細胞一直是各種形式的治療性蛋白和抗體的最常用表達系統。哺乳動物表達系統穩健，可擴展、成本相對較低，重要的是能進行翻譯后修飾，這對治療性蛋白的形成非常重要。隨著時間變化，不同的指導原則被用來規范包括細胞株開發(CLD)和生產制造在內的CHO細胞的藥物開發過程。這些指導原則用于確保患者所使用產品的安全性、一致性和可靠性。

哺乳動物細胞培養在包括單克隆抗體(mAb)在內的生物藥物生產中發揮了重要作用。在過去的幾十年中，為提高抗體產量并保證質量屬性，同時降低生產成本和上市時長，細胞培養技術方面已經完成了大量工作。為提高單克隆抗體產量，對細胞工程，細胞培養工藝和培養基優化都做了相應的研究。理想細胞培養工藝的關鍵推動力是所使用的細胞系及其比生產率、生長和維持高細胞量的能力、在生物反應器中維持穩定的工藝屬性并將一致的原料提供給下游。這樣的細胞培養工藝引起了生物學與工程學緊密合作，以產生持續的創新。

典型的哺乳動物細胞培養過程始于復蘇一支冷凍保存的細胞至細胞培養基中，細胞在受控的溫度和二氧化碳下在搖瓶或袋子中懸浮擴增。通常將細胞稀釋培養在新鮮培養基中，以使其保持指數生長并產生足夠的細胞量，以啟動生產培養。哺乳動物細胞的冷凍保存或冷凍能夠長期保存細胞系。當需要長時間(數年)來開發源自哺乳動物細胞的生物藥物并將其許可為市售產品時，這一點尤其重要。

生物治療藥物的持續商業成功的關鍵要求之一是細胞來源的可用性以啟動其生產。每個目標產品，可能經過多年開發，然后商業化，穩定的細胞存儲系統至關重要。低溫儲藏通常用于建立生產細胞系的細胞庫。被廣泛接受的包括主細胞庫(MCB)和工作細胞庫(WCB)在內的兩級細胞庫系統，最初在1963年細胞培養委員會研討會上提出。這種細胞存儲方式可以對細胞來源進行安全和質量測試，這是我們確保安全，可靠和可重復向患者提供生物治療藥物的方式之一。因此，冷凍保存在過去的二十年中得到了飛速發展。

《中國藥典》2015年版Ⅲ部《生物制品生產檢定用動物細胞基質制備及檢定規程》中規定，細胞凍存時，“應在大多數細胞處于對數生長期時進行細胞凍存，應采用符合細胞培養物的最佳凍存方法”，“每一次凍存時均應采用相同的降溫過程，并記錄凍存過程”。在對各級細胞庫的管理中，“為保證細胞凍存后仍具有良好的活力，凍存前的細胞活力應不低于90％，凍存后應取一定量的可代表凍存全過程的凍存管復蘇細胞，復蘇后細胞的活力應不低于80％”。對于凍存后細胞的考察，“可通過定期復蘇細胞及復蘇后細胞的活力數據驗證細胞在凍存及凍存條件下的穩定性”。《重組制品生產用哺乳動物細胞質量控制技術評價一般原則》中也表明，“當儲存的細胞復蘇后用于生產制品時，應進行細胞存活率和功能活性等與細胞質量密切關聯項目的研究測定，以證實復蘇細胞表達能力的穩定性”；“如果長時間未進行生產時，應按上市申請時所述的間隔時間對生產用細胞庫進行活力測試”。多個法規中均闡述了考察細胞活力的重要性，而影響復蘇后細胞活力的因素之一即為合適的凍存方案，包括凍存方法和配方。