[發明專利]一種抗體生產細胞的凍存制劑、其應用及凍存方法

在審

• 申請號: 202011217204.2
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN114431221A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 趙騰;沈毅珺;史文磊;楊彤
• 申請（專利權）人: 上海復旦張江生物醫藥股份有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

1.一種抗體生產細胞的凍存制劑，其特征在于，所述凍存制劑包含8-10％(v/v)的DMSO、0.1-0.3％(w/v)的羧甲基纖維素和/或其鹽。

2.如權利要求1所述的凍存制劑，其特征在于，所述凍存制劑還包含40-50％(v/v)的細胞培養基和41.7-49.9％(v/v)的條件培養基；所述細胞培養基優選為Hycell CHO細胞培養基，所述條件培養基按如下步驟制備：將所述抗體生產細胞接種于所述細胞培養基中進行培養，離心后取上清液即為所述條件培養基；所述離心優選250g離心5分鐘。

3.如權利要求2所述的凍存制劑，其特征在于，所述培養的條件為37℃、5％二氧化碳培養箱搖床震蕩培養3天，和/或，所述抗體生產細胞為轉染了抗體表達質粒的CHO-K1細胞。

4.如權利要求2或3所述的凍存制劑，其特征在于，所述凍存制劑包含0.2-0.3％(w/v)的羧甲基纖維素和/或其鹽和41.7-49.8％(v/v)的條件培養基。

5.如權利要求1-4任一項所述的凍存制劑，其特征在于，所述抗體生產細胞中，所述抗體為抗VEGF單克隆抗體或抗CD30單克隆抗體；優選地，所述抗VEGF單克隆抗體為貝伐珠單抗，所述CD30單克隆抗體為布妥昔單抗。

6.如權利要求1-5任一項所述的凍存制劑，所述羧甲基纖維素鹽為羧甲基纖維素鈉。

7.如權利要求6所述的凍存制劑，其特征在于，所述凍存制劑包含8％(v/v)的DMSO、0.2％(w/v)的羧甲基纖維素鈉、41.8％(v/v)的條件培養基和50％(v/v)的細胞培養基。

8.如權利要求1-7任一項所述的凍存制劑在制備凍存抗體生產細胞的試劑中的應用。

9.一種抗體生產細胞的凍存方法，其特征在于，將所述抗體生產細胞置于如權利要求1-7任一項所述的凍存制劑中保存。

10.如權利要求9所述的凍存方法，其特征在于，所述凍存方法包括如下步驟：將如權利要求1-7任一項所述的凍存制劑和所述抗體生產細胞混合，得所述抗體生產細胞的終濃度為1～2×10⁷/ml優選1.5×10⁷/ml的混合液，將所述混合液置于凍存管之中，再將凍存管放入程序降溫盒中，放置于-20℃冰箱放置2-3小時，轉移至-80℃冰箱放置16-30小時，然后轉移至液氮罐中長期儲存。