[發明專利]一種用于肺癌早期診斷的外泌體ecDNA生物標志物檢測試劑及其用途

在審

• 申請號: 202011214402.3
• 申請日: 2020-11-04
• 公開（公告）號: CN112143814A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 馬躍;張亞楠
• 申請（專利權）人: 上海思路迪生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京市蘭臺律師事務所 11354
• 代理人: 于越;張峰

本發明涉及一種用于肺癌早期診斷的外泌體ecDNA生物標志物檢測試劑，該生物標志物包括外泌體ecDNA生物標志物C?myc、EGFR和CyclinD1，作為預測早期肺癌的生物標志物。本發明首次提出并驗證了外泌體ecDNA作為生物標志物表達水平用于肺癌早診時具有快速、無傷害、高準確率、高特異性的優點，對于肺癌早期診斷具有重要意義。

技術領域

本發明涉及疾病早期檢測技術領域，尤其涉及一種用于肺癌早期診斷的外泌體ecDNA生物標志物檢測試劑。

背景技術

肺癌是世界范圍內發病率和死亡率最高的惡性腫瘤。肺癌早期病情隱匿，通常無任何癥狀，但大部分患者在初診時已處于中晚期，失去了手術切除的機會。晚期肺癌患者的五年生存率不足5％，而早期肺癌患者的五年生存率可達90％以上。因此，早期診斷是肺癌患者獲得良好預后的一個重要機會。

外泌體(exosome)是一種30-150nm大小、極低密度的細胞外納米級囊狀結構，由細胞經過“內吞-融合-外排”等一系列調控過程而形成。幾乎所有細胞都會分泌外泌體，細胞分泌的外泌體攜帶了來源細胞的諸多生物學信息，因此，外泌體也被認為是重要的潛在生物標記物，可以及時的反映來源細胞的生理與病理狀態。

ecDNA是近期腫瘤學領域的研究熱點，ecDNA指的是從染色體上脫落以環狀結構存在的DNA。研究表明ecDNA普遍存在于腫瘤細胞中，是生物標志物的載體，是腫瘤異質性的驅動力之一，會推動腫瘤的快速演化，并與腫瘤的發生、發展密切相關。

目前肺癌的早期診斷主要是根據早期臨床癥狀、影像學、支氣管鏡活檢以及痰液脫落細胞學等各方面配合進行診斷，但都具有其缺點和局限性。

肺癌在早期通常以肺結節的形式出現。利用影像學技術可以檢測出肺結節發生。影像學是利用X射線的透射性與攝影效應使人體內部結構和器官形成影像。人體組織結構是由不同元素所組成，各種組織單位體積內各元素量總和的大小而有不同的密度?；谌梭w組織有密度和厚度的差別，密度高對X線吸收多，照片上呈白影；密度低X線吸收少，照片上呈黑影。從而通過成像了解人體解剖與生理功能狀況以及病理變化，以達到診斷的目的。但采用影像學技術進行檢測，受制于深淺組織的影像相互重疊和隱藏，有時需要多次多角度拍攝X光片才能清楚分辨，操作難度大，對人員專業水平要求很高；X射線能穿透人體組織，有可能使人體體液和組織細胞產生生理和生物化學改變，引起不同程度的損傷；采用影像學技術誤漏診率高、特異性差。

支氣管鏡檢查是將細長的支氣管鏡經口或鼻置入患者的下呼吸道，即經過聲門進入氣管和支氣管以及更遠端，直接觀察氣管和支氣管的病變，并根據病變進行相應的檢查和治療。大多數肺部及氣道疾病，如腫瘤、間質性肺病、肉芽腫性疾病以及某些感染性疾病需要通過經支氣管鏡活檢術來確定診斷，這是最常用的一項檢查項目。但支氣管鏡活檢屬于“盲穿”，精準率偏低；實施過程中有穿刺到血管的危險，對病人有較大的風險。

咳嗽會產生強大的氣流，會使腫瘤細胞更容易脫落和痰液一起被咳出，肺部脫落細胞學檢查是肺癌早期診斷的重要方法之一。痰液細胞學檢查就是將懷疑肺癌患者排出的痰液進行涂片，然后在顯微鏡下觀察，根據涂片中細胞形態特點，檢查癌前病變,惡性腫瘤細胞或癌細胞，做出初步的細胞類型診斷。但在實際使用中，樣本采集要求較高，且僅能作為一種初步的定性診斷；由于診斷細胞學主要是觀察細胞形態變化而看不到組織結構的改變，因此存在一定的局限性，易出現假陰性或假陽性。

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明提出一種用于肺癌早期診斷的外泌體ecDNA生物標志物檢測試劑，利用人血液或體液外泌體ecDNA作為生物標志物區分早期肺癌患者時具有快速、無傷害、高準確率、高特異性的優點，能夠輔助肺癌早期診斷。

為實現以上目的，本發明所采用的技術方案包括：