[發明專利]一種異種脫細胞肌腱組織材料及其制備方法

有效

• 申請號: 202011212737.1
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112354015B
• 公開（公告）日: 2023-02-21
• 發明（設計）人: 趙金忠;李亞民;蔣佳;董士奎
• 申請（專利權）人: 上海市第六人民醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 北京惠科金知識產權代理有限公司 11981
• 代理人: 鄭萌萌

本發明提供了一種異種脫細胞肌腱組織材料及其制備方法，該制備方法包括如下步驟：(1)脫細胞前處理：采用循環漸進壓力模塊+分段超聲模塊，對豬肌腱組織進行疏松化；(2)脫細胞；(3)脫細胞后處理：吸除水洗液，加入中和液中和；吸除中和液，然后水洗兩次。本發明提供的異種脫細胞肌腱組織材料經過脫細胞前、中、后的一系列處理，盡可能地去除了細胞組分、DNA成分和免疫抗原成分，同時保存了肌腱組織的較高力學性能，改善脫細胞肌腱組織的pH，有利于細胞粘附增殖，組織誘導再生。該異種脫細胞肌腱組織材料可用于臨床上肌腱缺損修復、韌帶損傷修復和前交叉韌帶損傷重建手術，彌補了現有技術的不足。

技術領域

本發明涉及骨骼韌帶修復器具領域，尤其涉及一種異種脫細胞肌腱組織材料及其制備方法。

背景技術

韌帶肌腱組織損傷缺損是常見骨科疾病，手術縫合修復或者手術重建是臨床治療的重要方法。在手術中肌腱韌帶缺損是非常常見的，肌腱移植物是臨床的常用醫用耗材。一直以來，臨床醫生普遍采用患者自體肌腱進行肌腱韌帶重建，但是這種手術方式存在供區損傷，肌腱來源不足，手術耗時長，康復緩慢的缺點，相當于“拆東墻補西墻”。異體肌腱移植物是取自捐獻尸體的肌腱韌帶組織，進行相關處理后，用于韌帶重建修復，但是這種異體移植物仍然存在來源不充足，免疫排斥和傳播疾病風險。因此臨床需要一種來源充足、尺寸滿足要求的肌腱移植物，動物源的異種肌腱可以滿足這一要求。

異體/異種肌腱直接應用于患者存在很強的免疫反應，影響移植物在體內的再生重塑。因此，異體/異種肌腱必須經過脫細胞處理，盡可能的去除肌腱組織內細胞成分和DNA成分，才能盡可能的減輕免疫排斥反應。脫細胞方法是通過物理、化學及酶學手段，將異體組織中的細胞成份盡可能的去除，從而降低其免疫原性，降低宿主抗移植物反應。物理方法常用的有機械震蕩、血管擴張灌注、熱震蕩、超聲震蕩和手工破壞法。化學試劑大致包括以下幾類：去垢劑、溶劑、酸堿溶液、高滲或低滲的離子溶液。其中去垢劑是一類可溶于水的脂類，能夠裂解脂膜，溶解抗原，清除免疫復合物。自從發現其具有溶解細胞膜的特性后就在脫細胞操作中被廣泛使用。但是上述脫細胞方法處理后脫細胞組織為酸性，不利于細胞的浸潤粘附和增殖，影響組織再生。而且，肌腱組織由于其組織結構致密，裂解液滲入困難，脫細胞不完全，導致細胞、DNA殘留，免疫源性不能降低到理想水平。目前已有異種組織用于臨床組織修補，如豬小腸粘膜下層組織，豬真皮組織。而異種組織的脫細胞程度，抗原清除率直接影響其臨床效果。此外，肌腱移植物對力學要求高，這使得異種肌腱移植物在脫細胞處理過程中不能損傷異種肌腱的力學性能。

鑒于上述難點，本發明擬提供一種具有良好力學性能的異種脫細胞肌腱組織材料及其制備方法。

發明內容

制備異種脫細胞肌腱組織材料目前存在以下難點：1肌腱組織由于其組織結構致密，裂解液滲入困難，脫細胞不完全，導致細胞、DNA殘留，免疫源性不能降低到理想水平；2目前脫細胞方案容易導致脫細胞組織成酸性，不利于細胞粘附增殖；3肌腱移植物對力學性能要求高，脫細胞過程容易損傷原有組織的機械性能，導致脫細胞肌腱組織不能滿足臨床手術修復的要求。為了克服現有技術中的缺陷，本發明提供了一種異種脫細胞肌腱組織材料及其制備方法，該材料經過脫細胞前、中、后的一系列處理，盡可能的去除了細胞組分、DNA成分和免疫抗原成分，同時保存了肌腱組織的較高力學性能，改善脫細胞肌腱組織的pH，有利于細胞粘附增殖，組織誘導再生。

為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

本發明的第一個方面是提供一種異種脫細胞肌腱組織材料的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，脫細胞前處理：采用循環漸進壓力模塊+分段超聲模塊，對肌腱組織結構進行疏松化；

步驟二，脫細胞：

S1，對前處理后的肌腱用去離子水進行水洗兩次；

S2，吸除水洗液，加入10-50mL消化液，置于50-500rpm揺床中消化0.5-4h；