[發(fā)明專利]一種裙帶菜抗腫瘤小分子肽及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011209544.0
• 申請(qǐng)日: 2020-11-03
• 公開（公告）號(hào): CN112301082A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于慧;劉海梅;趙芹;吳紅艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 魯東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/06
• 分類號(hào): C12P21/06;C07K1/34;A23L33/18
• 代理公司: 北京中濟(jì)緯天專利代理有限公司 11429
• 代理人: 潘劍敏

本發(fā)明提供一種裙帶菜抗腫瘤小分子肽的制備方法。步驟如下：挑選裙帶菜清水浸泡，漂洗干凈后進(jìn)行低溫干燥，經(jīng)粉碎后顆粒粒度為4μm以下；向裙帶菜粉末中加入其質(zhì)量25～100倍的超純水，攪拌均勻后調(diào)節(jié)pH值至1～2，加入胃蛋白酶進(jìn)行酶解，調(diào)節(jié)pH值至7～9，加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解解，再調(diào)節(jié)pH值，加入復(fù)合蛋白酶進(jìn)行酶解；后加入乙醇至體系乙醇體積分?jǐn)?shù)為40～60％，靜置、離心取上清液；上清液經(jīng)減壓濃縮后，采用分子量為3KD的超濾膜超濾，截留分子量大小為3KD以下的酶解液，后采用納濾進(jìn)行脫鹽處理，再進(jìn)行冷凍干燥，即可獲得裙帶菜抗腫瘤小分子肽。本發(fā)明不僅能提高裙帶菜的資源利用率，而且能為抗腫瘤的保健食品、功能食品、特醫(yī)食品的開發(fā)提供優(yōu)質(zhì)的食品原料。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明公開了一種裙帶菜抗腫瘤小分子肽及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

21世紀(jì)以來，惡性腫瘤是影響人類生命和健康的一大殺手，抗腫瘤物質(zhì)的研究成為一大熱點(diǎn)。地球上海洋資源最為豐富，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)海洋來源的抗腫瘤活性物質(zhì)有數(shù)千種，其中海洋多肽以其分子量小、靶向性高、吸收快、效應(yīng)高、副作用小吸引了廣大科研工作者的關(guān)注。

裙帶菜(Undaria pinnatifida)屬褐藻門、褐子綱、海帶目、翅藻科、裙帶菜屬，是經(jīng)濟(jì)價(jià)值和藥用價(jià)值很高的大型褐藻，含有多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，除多糖和粗纖維外，其蛋白質(zhì)含量約占藻體的14％～17％，遼寧、山東有豐富的裙帶菜資源。目前，我國(guó)對(duì)裙帶菜的加工利用還處于初級(jí)階段，人們主要是將裙帶菜曬干或鹽漬后食用。工業(yè)上對(duì)裙帶菜的綜合利用主要以提取海藻酸鈉和碘為主，工業(yè)利用率低，仍有50％以上的海藻成分成為廢棄物，其中蛋白質(zhì)占60％，未得到有效利用。

裙帶菜蛋白質(zhì)的含量不僅較高，而且氨基酸種類齊全，包括人體不能合成的8種必需氨基酸，其氨基酸模式符合理想蛋白質(zhì)氨基酸模式，這為開發(fā)裙帶菜生物活性肽提供了較好的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前，有關(guān)裙帶菜的蛋白質(zhì)功能研究，集中在其酶解多肽的降血壓和抗氧化(食品科學(xué),2017,38(6):96-103)方面。

發(fā)明內(nèi)容

為拓展裙帶菜在食品和生物學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用，本發(fā)明的目的是提供一種裙帶菜抗腫瘤小分子肽及其制備方法和應(yīng)用。小分子肽應(yīng)用于治療和預(yù)防胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌等有關(guān)腫瘤疾病的保健食品、功能食品、特醫(yī)食品及其食品組合物中。

為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用如下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供一種裙帶菜抗腫瘤小分子肽的制備方法，步驟如下：

(1)挑選裙帶菜清水浸泡，漂洗干凈后切成適當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度，在20～40℃下進(jìn)行低溫干燥，經(jīng)粗粉碎后采用超聲波粉碎機(jī)粉碎至顆粒粒度為4μm以下；

(2)向步驟(1)獲得的裙帶菜粉末中加入其質(zhì)量25～100倍的超純水，攪拌均勻后使用0.01～0.2mol/L的HCl和NaOH來調(diào)節(jié)反應(yīng)體系的pH值至1～2，加入胃蛋白酶，在控制條件下進(jìn)行酶解，酶解完成后再采用相同方法調(diào)節(jié)pH值至7～9，加入胰蛋白酶在控制條件下進(jìn)行酶解；

(3)酶解結(jié)束后，向步驟(2)的酶解液中加入乙醇至體系乙醇體積分?jǐn)?shù)為40～60％，靜置12～24h，離心取上清液。

(4)將步驟(3)得到的上清液，經(jīng)減壓濃縮后，采用分子量為3KD的超濾膜超濾，截留分子量大小為3KD以下的酶解液，然后采用納濾進(jìn)行脫鹽處理。

(5)將步驟(4)得到的溶液進(jìn)行冷凍干燥，即可獲得分子量大小為3KD以下的裙帶菜抗腫瘤小分子肽。

上述的方法中，步驟(1)中的裙帶菜可為裙帶菜的葉、梗、孢子葉及其提糖后的副產(chǎn)物。進(jìn)一步的，若為提糖后的副產(chǎn)物不需經(jīng)過干燥和粉碎，可直接進(jìn)行酶解。

上述的方法中，所述步驟步驟(2)周加入胰蛋白酶進(jìn)行酶解之后，采用相同方法調(diào)節(jié)pH值至6～8，加入復(fù)合蛋白酶在控制條件下進(jìn)行酶解。