[發(fā)明專利]一種共表達(dá)磷脂酶促進(jìn)蛋白在枯草芽孢桿菌中胞外表達(dá)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011209142.0
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112322602B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳敬;宿玲恰;黃燕
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N9/18
• 分類號: C12N9/18;C12N9/16;C12N1/21;C12N15/75;C12N9/10;C12N9/90;C12R1/125
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 仇鈺瑩

1.磷脂酶在促進(jìn)枯草芽孢桿菌胞內(nèi)蛋白向胞外分泌方面的應(yīng)用，其特征在于，所述磷脂酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或SEQ ID NO.3所示；所述胞內(nèi)蛋白為含有SEQ IDNO.5所示的氨基酸序列的海藻糖合酶或含有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的分支酶。

2.一種重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或SEQ IDNO.3所示的磷脂酶與含有SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的海藻糖合酶、含有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的分支酶中的至少一種酶共表達(dá)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，以質(zhì)粒pHY300PLK為表達(dá)載體。

4.一種使枯草芽孢桿菌的胞內(nèi)蛋白在胞外表達(dá)的方法，其特征在于，共表達(dá)磷脂酶與目標(biāo)蛋白；所述磷脂酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.3所示；所述目標(biāo)蛋白為含有SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的海藻糖合酶或含有SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列的分支酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征礙于，包括如下步驟：

(1)將編碼磷脂酶的基因和目標(biāo)蛋白的基因連接至質(zhì)粒pHY300PLK，構(gòu)建含有編碼的基因的質(zhì)粒載體；

(2)將步驟(1)構(gòu)建的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化進(jìn)枯草芽孢桿菌宿主細(xì)胞(Bacillus subtilis)WS5中。

6.一種生產(chǎn)目的蛋白的方法，其特征在于，將權(quán)利要求2或3所述的重組枯草芽孢桿菌接種至培養(yǎng)基中，于25～40℃發(fā)酵。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，還將發(fā)酵液離心去除菌體，收集離心后的上清液。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，，將發(fā)酵液離心去除菌體，收集離心后的上清液，并對上清液中的目的蛋白進(jìn)行分離、純化。

9.權(quán)利要求2或3所述的重組枯草芽孢桿菌，或權(quán)利要求6～8任一所述的方法在發(fā)酵產(chǎn)酶或參與酶解催化反應(yīng)方面的應(yīng)用。