[發明專利]以木質素衍生物生產粘康酸的工程菌構建方法及其應用在審
| 申請號： | 202011209134.6 | 申請日： | 2020-11-03 |
| 公開（公告）號： | CN112430616A | 公開（公告）日： | 2021-03-02 |
| 發明（設計）人： | 袁吉鋒 | 申請（專利權）人： | 廈門大學 |
| 主分類號： | C12N15/70 | 分類號： | C12N15/70;C12N15/60;C12N15/53;C12N1/21;C12P7/44;C12R1/19 |
| 代理公司： | 廈門創象知識產權代理有限公司 35232 | 代理人： | 王鳳玲;尤懷成 |
| 地址： | 361000 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 木質素 衍生物 生產 粘康酸 工程 構建 方法 及其 應用 | ||
1.一種以木質素衍生物生產粘康酸的工程菌構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
向大腸桿菌中轉化含有香蘭酸去甲基化酶基因VanAB的重組質粒以及含有脫羧酶基因GDC和兒茶酚雙加氧酶基因CatA的重組質粒。
2.如權利要求1所述的工程菌構建方法，其特征在于，所述香蘭酸去甲基化酶基因VanAB基因是以惡臭假單胞菌KT2440基因組為模板，以SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4所示序列為引物，經PCR擴增得到。
3.如權利要求1所述的工程菌構建方法，其特征在于，所述脫羧酶基因GDC和兒茶酚雙加氧酶基因CatA是以含有GDC/CatA基因的質粒作為模版，以SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示序列為引物，經PCR擴增得到。
4.一種以木質素衍生物生產粘康酸的工程菌，其特征在于，由如權利要求1-3中任一項所述的工程菌構建方法構建得到。
5.一種粘康酸的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
將權利要求4所述的工程菌接種于培養基中發酵培養，即得。
6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
將所述工程菌進行活化和擴大培養，先接種于LB培養基中過夜培養，之后按1:100比例將過夜培養物轉接入TB培養液中培養，然后加入誘導劑IPTG進行誘導培養，離心收集細胞；
采用pH＝8的磷酸鹽緩沖液反應體系，在30℃下催化香蘭酸反應為粘康酸，以液相色譜檢測粘康酸產量。
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