[發明專利]一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202011209095.X
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112485233B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 張春陽;胡娟;潘麗媛;李玥穎
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;B82Y15/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李圣梅

1.一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述納米傳感器包括帶有賴氨酸乙酰基且有Cy5標記的肽底物和被鏈霉親和素包被的量子點，通過鏈霉親和素-生物素化相互作用將肽連接到鏈霉親和素修飾的量子點表面；

肽的賴氨酸被生物素化修飾，N末端Cy5修飾；底物序列為Cy5-Glu-lle-Ala-Gln-Asp-Phe-Lys(Ac)-Thr-Asp-Leu-Arg；

所述檢測去乙酰化酶用納米傳感器的制備步驟包括：

（1）將待檢測樣品加入至生物素化試劑，進行生物素化；

（2）將生物素化產物加入到含有量子點的孵育緩沖溶液中孵育，獲得檢測去乙酰化酶用納米傳感器。

2.如權利要求1所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述量子點為鏈霉親和素包被的量子點；所述生物素化試劑選自sulfo-NHS-biotin、sulfo-NHS-LC-biotin或sulfo-NHS-SS-biotin。

3.如權利要求2所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述生物素化試劑為sulfo-NHS-biotin。

4.如權利要求1所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，步驟（1）中，所述待檢測樣品包括Cy5標記的肽底物、SIRT1、NAD ⁺和去乙酰化緩沖液。

5.如權利要求4所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述待檢測樣品的體積為10μL；

所述Cy5標記的肽底物的濃度為200-350μM；

所述NAD ⁺的濃度為0.5-2.0 mM；

所述去乙酰化緩沖液的pH為 8.0，包括20 mM HEPES，150 mM NaCl，2.7 mM KCl，1 mMMgCl₂。

6.如權利要求4所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述Cy5標記的肽底物的濃度為300μM；所述NAD ⁺的濃度為1mM。

7.如權利要求1所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，步驟（1）中，所述待檢測樣品進行生物素化之前，需要在30-45℃下孵育1-3個小時，得到去乙酰化產物。

8.如權利要求7所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，步驟（1）中，所述待檢測樣品進行生物素化之前，需要在37℃下孵育1.5小時，得到去乙酰化產物。

9.如權利要求7所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，將所得到的去乙酰化產物用生物素化試劑和HEPES至總體積為50μL，進行生物素化反應。

10.如權利要求9所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述生物素化試劑的濃度為100-150μM，所述HEPES的pH為7.0-9.0，濃度為10-30mM；

所述生物素化反應的溫度為10-30℃，反應時間為1-4h。

11.如權利要求9所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，所述生物素化試劑的濃度為20 mM，所述HEPES的pH為8.0；

所述生物素化反應的溫度為20℃，反應時間為3h。

12.如權利要求1所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，步驟（2）中，所述生物素化產物的體積為0.5-1.5μL。

13.如權利要求12所述的一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，其特征是，步驟（2）中，所述生物素化產物的體積為0.9μL。