[發明專利]一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 202011209095.X
• 申請日: 2020-11-03
• 公開（公告）號: CN112485233B
• 公開（公告）日: 2022-08-26
• 發明（設計）人: 張春陽;胡娟;潘麗媛;李玥穎
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;B82Y15/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 李圣梅

本發明屬于分析檢測技術領域，尤其涉及一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器及其檢測方法和應用。所述納米傳感器包括帶有賴氨酸乙酰基且有Cy5標記的肽底物和被鏈霉親和素包被的量子點，通過鏈霉親和素?生物素化相互作用將所述肽連接到鏈霉親和素修飾的量子點表面。該納米傳感器具有較高的特異性和靈敏度，并且，檢測步驟簡單，無需任何洗滌和分離步驟，無放射性污染物的產生。

技術領域

本發明屬于分析檢測技術領域，尤其涉及一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器及其檢測方法和應用。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

賴氨酸側鏈的乙酰化是重要的翻譯后修飾，在多種信號傳導環境中影響蛋白質功能。賴氨酸的乙酰化狀態受賴氨酸乙酰化酶和賴氨酸去乙酰化酶的調控。Sirtuin 1(SIRT1)是一種重要的組蛋白去乙酰化酶，它可以利用煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)代替鋅作為輔因子來催化乙酰基從賴氨酸殘基上去除。SIRT1與許多生物學過程密切相關，其中包括應激反應、DNA修復、代謝及凋亡、衰老。因此，SIRT1活性的檢測具有重要意義。

組蛋白去乙酰化酶的檢測方法包括放射性標記法、高效液相色譜法、免疫印跡法、分光光度法、質譜法。傳統的放射性測定法通過監測放射性標記的肽所釋放的[3H]乙酸鹽或放射性標記的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)所釋放的[14C]煙酰胺來檢測SIRT1的活性。高相液相色譜法以液體為流動相，利用底物與產物之間不同的洗脫特性，從而在柱內將各種成分分離，進入檢測器進行檢測。免疫印跡法采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。分光光度法通過測定酶在特定波長處或一定波長范圍內光的吸收度，進而對該酶進行定性和定量分析。質譜法通過在自組裝單分子膜上形成的肽陣列與質譜的結合，從而提供了一種無標記的方法來鑒定酶活性的模式。

但是，發明人發現，這些方法存在產生放射性廢物、需通過溶劑萃取和離子交換樹脂分離反應產物、步驟操作繁瑣以及復雜的標記底物等缺點。為了克服上述缺陷，通過結合編碼熒光探針、分子內酯交換探針和聚集誘導發射型探針，利用發光分析法，用于SIRT1活性測定。然而，這些方法需要通過肽/抗體的共價標記制備探針，操作繁瑣。因此，非常需要設計一種簡單的方法來準確，靈敏地檢測SIRT1活性。

發明內容

為了解決現有技術的不足，本公開的目的是提供一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器及其檢測方法和應用，該納米傳感器具有較高的特異性和靈敏度，并且，檢測步驟簡單，無需任何洗滌和分離步驟，無放射性污染物的產生。

具體地，本公開的技術方案如下所述：

在本公開的第一方面，提供一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器，所述納米傳感器包括帶有賴氨酸乙酰基且有Cy5標記的肽底物和被鏈霉親和素包被的量子點，通過鏈霉親和素-生物素化相互作用將所述肽連接到鏈霉親和素修飾的量子點表面。

在本公開的第二方面，提供一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器的檢測方法，具體檢測方法如下：

(1)、將待檢測樣品加入至生物素化試劑，進行生物素化；

(2)、將步驟(1)獲得的生物素化產物加入到含有量子點的緩沖溶液中孵育，獲得檢測去乙酰化酶用納米傳感器；

(3)、采用全內角反射熒光技術的單分子熒光成像系統對Cy5的熒光信號進行檢測，以定量檢測待測樣品中的去乙酰化酶。

在本公開的第三方面，提供一種檢測去乙酰化酶用納米傳感器在檢測去乙酰化酶活性和/或篩選去乙酰化酶抑制劑和/或檢測細胞中的去乙酰化酶中的應用。