[發(fā)明專利]一種利用角質(zhì)酶促進蛋白在枯草芽孢桿菌中胞外表達的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011208395.6 | 申請日： | 2020-11-03 |
| 公開（公告）號： | CN112301015B | 公開（公告）日： | 2022-03-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 吳敬;宿玲恰;黃燕 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/18 | 分類號： | C12N9/18;C12N15/55;C12N1/21;C12N15/75;C12R1/125 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇鈺瑩 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 角質(zhì) 促進 蛋白 枯草 芽孢 桿菌 外表 方法 | ||
1.一種角質(zhì)酶突變體，其特征在于，所述角質(zhì)酶突變體是將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角質(zhì)酶的第214位的氨基酸突變?yōu)楸彼岬玫降模?/p>
或，所述角質(zhì)酶突變體是將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的角質(zhì)酶的第213位和第214位氨基酸同時突變?yōu)楸彼岬玫降摹?/p>
2.編碼權(quán)利要求所述突變體的基因。
3.攜帶權(quán)利要求2所述基因的載體。
4.攜帶權(quán)利要求2所述基因，或權(quán)利要求3所述載體的重組細胞。
5.一種重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，共表達了權(quán)利要求1所述的角質(zhì)酶突變體與胞內(nèi)蛋白。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述胞內(nèi)蛋白包括但不限于木糖異構(gòu)酶、4,6-α-葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶、4-α-糖基轉(zhuǎn)移酶、海藻糖合酶和分支酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述重組枯草芽孢桿菌以枯草芽孢桿菌WS5、枯草芽孢桿菌168、枯草芽孢桿菌W600、枯草芽孢桿菌W800、枯草芽孢桿菌RIK1285中的任一為表達宿主；
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，所述重組枯草芽孢桿菌以pHY300PLK、PUB110、pBE-S、pWB980中的任一為表達載體。
9.權(quán)利要求1所述的突變體，或權(quán)利要求3所述的基因，或權(quán)利要求4所述的載體在促進枯草芽孢桿菌將重組胞內(nèi)酶在胞外表達的中應(yīng)用。
10.一種生產(chǎn)胞外蛋白的方法，其特征在于，將權(quán)利要求5～8任一所述的重組枯草芽孢桿菌接種至種子培養(yǎng)基中，得到種子液；將種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，得到發(fā)酵液；將發(fā)酵液離心，收集發(fā)酵上清液。
11.權(quán)利要求1所述的突變體，或權(quán)利要求3所述的基因，或權(quán)利要求4所述的載體，或權(quán)利要求5所述的重組細胞，或權(quán)利要求6～8任一所述的重組枯草芽孢桿菌在發(fā)酵產(chǎn)酶或參與酶解催化反應(yīng)方面的應(yīng)用。
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