[發明專利]一種臍帶間充質干細胞的培養方法及其應用

在審

• 申請號: 202011205241.1
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號: CN112111450A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 鄭大學;劉偉;丁星
• 申請（專利權）人: 貴州北科生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A01N1/02
• 代理公司: 深圳市鼎智專利代理事務所(普通合伙) 44411
• 代理人: 曹勇

本發明公開一種臍帶間充質干細胞的培養方法及其應用，方法包括：細胞制備??細胞培養??細胞凍存，相對于現有技術，可以避免由于浸泡于液相所導致的細菌、霉菌等病原體、DNA、RNA等的交互污染。也可避免因所用管蓋泄漏引起的對其他存儲臍帶間充質干細胞的污染，使存儲的臍帶間充質干細胞的安全性和將來的臨床研究應用得以保證。同時節省存儲空間，進而降低成本。同時，本發明制備的臍帶間充質干細胞應用于藥物的制備以及實驗室中。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種臍帶間充質干細胞的培養方法及其應用。

背景技術

間充質干細胞(Mesenchymal Stem Cell,MSC)是干細胞的一種，因能在體內外特定環境下分化為骨、軟骨、脂肪、肌肉等間質組織而得名。廣泛存在于多種組織中，如臍帶、胎盤、脂肪、肺、心臟、腦、小腸、骨髓等。

間充質干細胞的特點包括：

1)在塑料培養皿內貼壁生長，在含血清的培養基內高度增殖；

2)表達細胞表面標志CD105、CD73、CD90，不表達CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79a或CD19、HLA-DR；3)在體外可以分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞。

間充質干細胞的分化與其所處微環境相關，進入到不同的組織中可以分化成不同的細胞。比如干細胞進入到肝臟可以分化為肝細胞，在神經中則分化為神經細胞，從而發揮不同的功能。哪里有損傷，哪里有老化，哪里有病變，干細胞就在那里聚集，在那里濃度就高。在合適條件下可以進行擴增，從而實現數量上的增長，滿足使用需求。

間充質干細胞可以加快造血微環境的重建，通過與造血干細胞相互作用、分泌表達造血相關的因子來支持和促進造血的順利進行。具有免疫抑制能力，可抑制機體亢進的免疫反應，促進免疫功能恢復平衡。在特定合適條件下可向心肌、骨骼、肌肉、脂肪、神經等組織細胞分化。可以通過分泌相關因子改善附近細胞生長微環境，促進其再生或修復。在人體以外的合適培養條件下，短時間內即可實現數目上的倍增，可滿足臨床大用量需求。

由于臍帶來源的間充質干細胞對多種疾病潛在的臨床研究作用，臍帶間充質干細胞己被在基礎醫學試驗方法上進行了廣泛的研究。但是傳統的細胞生物學方法在制備和存儲臍帶間充質干細胞的過程中，容易被病原體污染，也可能出現所存儲的不同個體臍帶間充質干細胞之間的交互污染，從而影響這些臍帶間充質干細胞的臨床應用，嚴重的使臍帶間充質干細胞喪失臨床應用價值。

發明內容

本發明的主要目的是提供一種臍帶間充質干細胞的培養方法及其應用，以解決背景技術中存在的問題。

為實現上述目的，本發明提出的臍帶間充質干細胞的培養方法，包括以下步驟：

S10：對脫離人體的臍帶間充質干細胞進行制備；

S101：取出所需的耗材整齊排列在物料推車上，對耗材進行消毒，將其放入已清潔的生物安全柜中，取出完全培養基，放置在物料推車上待其恢復至室溫；

S102：在生物安全柜中央間隔排放六個培養皿，其中五個培養皿倒入30-40mL的0.9％氯化鈉注射液備用；

S103：向臍帶采集瓶中倒入75％醫用酒精，浸沒臍帶，對臍帶消毒滅菌，用無菌止血鉗從臍帶采集瓶中取出臍帶并放入第一個培養皿，使其浸泡在0.9％氯化鈉注射液中，去除臍帶表面血漬、粘液，將臍帶轉移至第二個培養中重復洗滌，以徹底去除臍帶表面血漬；

S104：用無菌組織剪剪去臍帶兩端，棄去，將部分臍帶剪成小段，剩余臍帶裝入50mL離心管中做備份，并貼上對應標簽，清洗臍帶小段，去除淤血和凝塊，將臍帶小段轉移到第三個培養皿中洗滌，以徹底清除臍帶小段血管中淤血和凝塊；