[發(fā)明專(zhuān)利]高產(chǎn)血紅素的重組質(zhì)粒和基因工程菌株及其構(gòu)建方法、高產(chǎn)血紅素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011204558.3
• 申請(qǐng)日: 2020-11-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112301049B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-10-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 俞漢青;李洋;湯強(qiáng);劉東風(fēng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/74
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/74;C12N1/21;C12P17/18;C12R1/01
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.一種高產(chǎn)血紅素的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒包括如下基因：hemA、hemL、hemB1、hemB2、hemC、hemD、hemE、hemN、hemG1、hemG2、hemG3、hemH1、hemH2和ccmf；

所述hemA、hemL、hemB1、hemB2、hemC、hemD、hemE、hemN、hemG1、hemG2、hemG3、hemH1、hemH2的來(lái)源為E. coli MG1655；

所述ccmf的來(lái)源為S. oneidensis MR-1。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒的質(zhì)粒載體為pBF-PTetO；

所述質(zhì)粒載體的序列如SEQ ID NO：1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1至2中任一項(xiàng)所述的重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒的序列如SEQ ID NO：2所示。

4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述重組質(zhì)粒的構(gòu)建方法，其特征在于，包括如下步驟：

以質(zhì)粒載體為模板，擴(kuò)增得到質(zhì)粒骨架；

以E. coli MG1655基因組為模板擴(kuò)增hemA，hemL，hemB，將得到的DNA片段與質(zhì)粒骨架組裝得到質(zhì)粒-HE1；

以E. coli MG1655基因組為模板擴(kuò)增hemC，hemD，hemE，hemN，將得到的DNA片段與質(zhì)粒骨架組裝得到質(zhì)粒-HE2；

以E. coli MG1655基因組為模板擴(kuò)增hemG1, hemG2, hemG3，hemH1，hemH2，將得到的DNA片段與質(zhì)粒骨架組裝得到質(zhì)粒-HE 3；

以S. oneidensis MR-1基因組為模板擴(kuò)增ccmF，將得到的DNA片段與質(zhì)粒骨架組裝得到質(zhì)粒-HE 4；

在得到質(zhì)粒-HE1、質(zhì)粒-HE2、質(zhì)粒-HE3、質(zhì)粒-HE4的基礎(chǔ)上，將HE1、HE2、HE3、HE4DNA片段進(jìn)行組裝，得到重組質(zhì)粒。

5.一種高產(chǎn)血紅素的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株包括權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的重組質(zhì)粒；所述基因工程菌株的宿主菌為S. oneidensis MR-1；所述基因工程菌株的啟動(dòng)子為四環(huán)素誘導(dǎo)型啟動(dòng)子系統(tǒng)。

6.一種高產(chǎn)血紅素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

培養(yǎng)權(quán)利要求5所述基因工程菌株，當(dāng)菌液的OD₆₀₀為0.15~0.25時(shí)加入誘導(dǎo)劑進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，收集上清液。