[發(fā)明專利]定量檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011203328.5
• 申請日: 2020-11-02
• 公開（公告）號(hào): CN112210625A
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣析文;劉悅;董子維;楊迪;陳悅寧
• 申請（專利權(quán)）人: 中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海助之鑫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31328
• 代理人: 陳詳

本發(fā)明提供了定量檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的試劑盒及方法，具體地本發(fā)明采用數(shù)字PCR技術(shù)，定量檢測人外周血樣品中每百萬單個(gè)核細(xì)胞中人類免疫缺陷病毒1型HIV?1 DNA的含量，能實(shí)現(xiàn)核酸分子的絕對(duì)定量，無需定量標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)于樣本的定量檢測具有更高的準(zhǔn)確性和靈敏度。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及利用數(shù)字PCR技術(shù)定量檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的試劑盒及方法。

背景技術(shù)

人類免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiencyVirus；abbr:HIV)，即艾滋病(AIDS，獲得性免疫缺陷綜合征)病毒，是造成人類免疫系統(tǒng)缺陷的一種病毒。HIV-1病毒是一種RNA病毒，主要侵染人體中的免疫細(xì)胞，進(jìn)入人體的HIV-1病毒經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄后將自身序列整合至人基因組序列上，之后再利用人細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)進(jìn)行大量復(fù)制，嚴(yán)重破壞人體的免疫系統(tǒng)。

目前的HIV-1的檢測還是以全血中RNA檢測為主，市面上有很多RNA的定量定性檢測產(chǎn)品，但缺乏定量檢測人體中單個(gè)核細(xì)胞中HIV-1前病毒的準(zhǔn)確載量的產(chǎn)品。

目前HIV-1主要采用核苷酸類藥物治療，但有很多研究和文獻(xiàn)報(bào)告了針對(duì)HIV-1DNA整合在人體細(xì)胞基因組的治療方法，意在徹底去除人體中的HIV-1，例如細(xì)胞療法等。因此定量檢測人體中HIV-1DNA載量的方法或者試劑盒就尤為重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種定量檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的試劑盒及方法。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的引物對(duì)集，所述引物對(duì)集包括：

第一引物對(duì)，所述第一引物對(duì)包括如SEQ ID NO.1所示的正向引物；和，如SEQ IDNO.2所示的反向引物。

在另一優(yōu)選例中，所述引物對(duì)集還包括：

第二引物對(duì)，所述第二引物對(duì)包括如SEQ ID NO.4所示的正向引物；和，如SEQ IDNO.5所示的反向引物。

本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的探針集，所述探針集包括：SEQ ID NO.3所示的第一探針。

在另一優(yōu)選例中，所述探針集還包括：SEQ ID NO.6所示的第二探針。

在另一優(yōu)選例中，所述第一探針的5’端包含有熒光報(bào)告基團(tuán)；和/或，所述第一探針的3’端包含有熒光淬滅基團(tuán)。

在另一優(yōu)選例中，所述第二探針的5’端包含有熒光報(bào)告基團(tuán)；和/或，所述第二探針的3’端包含有熒光淬滅基團(tuán)。

在另一優(yōu)選例中，所述第一探針標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)不同于所述第二探針標(biāo)記的熒光報(bào)告基團(tuán)。

本發(fā)明的第三方面，提供了一種用于檢測人類免疫缺陷病毒1型DNA載量的試劑盒，所述試劑盒包括本發(fā)明第一方面所述的引物對(duì)集。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒還包括本發(fā)明第二方面所述的探針集。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒包括第一容器，所述第一容器內(nèi)包含第一引物探針混合液，所述第一引物探針混合液中包含SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的多核苷酸序列。

在另一優(yōu)選例中，所述試劑盒包括第二容器，所述第二容器內(nèi)包含第二引物探針混合液，所述第二引物探針混合液中包含SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的多核苷酸序列。