[發明專利]一種檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011198027.8
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112326972A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 唐小龍;謝春梅;疏瑞文;張殷慈;余盼;馬詠芳;徐如月;蔡文鵬;張榮波
• 申請（專利權）人: 安徽理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司 50212
• 代理人: 李媛

1.一種檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，包括含有生物素標記的完整PINP檢測抗體的試劑R1、含有吖啶酯標記的鏈霉親和素的試劑R2和含有完整PINP捕獲抗體包被的磁微球的試劑R3；所述捕獲抗體和檢測抗體是針對完整PINP抗原不同決定簇的兩種不同的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，所述捕獲抗體的包被濃度為5～20μg/mL。

3.根據權利要求1所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，所述吖啶酯標記的鏈霉親和素中吖啶酯與鏈霉親和素的質量比為1:25~100；所述生物素標記的完整PINP檢測抗體中生物素與檢測抗體的質量比為1:5~15。

4.根據權利要求1所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，還包括預激發溶液，所述預激發溶液包括酸性激發液和堿性激發液，所述酸性激發液為過氧化氫和硝酸溶液，所述堿性激發液為氫氧化鈉溶液。

5.根據權利要求1所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，所述捕獲抗體包被的磁微球采用以下步驟制得：

1）向懸浮磁性微球液體中加入EDC/NHS活化劑，置于30℃旋轉，激活磁性微球表面上的羧基，再加入結合緩沖液，并將磁性架清洗多次，得到活化的磁性微球；

2）將捕獲抗體添加到活化的磁性微球中，并將磁性微球的濃度調節至15~20 mg / mL，然后在室溫下置于懸浮渦旋振蕩器上充分震蕩，然后加入封閉緩沖液充分反應，反應結束后用封閉緩沖液洗滌并重懸，即得到捕獲抗體包被的磁微球。

6.根據權利要求5所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，所述EDC/NHS活化劑中EDC與NHS的摩爾比為5:8。

7.根據權利要求5所述檢測血清中完整PINP的化學發光定量檢測試劑盒，其特征在于，所述封閉緩沖液為含有體積濃度2.5％的牛血清蛋白的Tris-堿溶液；所述結合緩沖液為0.1M的MES，pH 5.0。

8.如權利要求1~7任一項所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1：向60 μL含有完整PINP捕獲抗體包被的磁微球試劑中加入50 μL濃度梯度的標準品溶液，然后加入60 μL含有生物素標記的完整PINP檢測抗體的試劑，輕輕振蕩混勻，在室溫條件下共同孵育15min，然后用洗滌緩沖液充分洗滌，再加入吖啶酯標記的鏈霉親和素，在室溫下反應10min，然后用洗滌緩沖液充分洗滌，最后添加預激發溶液，同時使用發光儀測定光密度值，以各校準品的光密度值的對數為縱坐標，各校準品的濃度的對數為橫坐標作圖，得到標準曲線；

S2：將待測血清樣品代替標準品溶液，其它步驟同S1，將得到待測血清樣本的光密度值代入標準曲線，得到待測血清中完整PINP的含量。

9.根據權利要求8所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述生物素標記的完整PINP檢測抗體的稀釋度為1:100～500，優選為1:250。

10.根據權利要求8所述檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述吖啶酯標記的鏈霉親和素的稀釋度為1:100～1000，優選為1:250。