[發(fā)明專利]一種檢測血清中完整PINP的化學(xué)發(fā)光定量檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011198027.8
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112326972A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 唐小龍;謝春梅;疏瑞文;張殷慈;余盼;馬詠芳;徐如月;蔡文鵬;張榮波
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 李媛

本發(fā)明涉及一種檢測血清中完整PINP的化學(xué)發(fā)光定量檢測試劑盒，該試劑盒是基于血清中完整的PINP作為標志物，由于血液中完整的PINP代謝不受腎臟功能的影響，因此可以真實準確反映1型膠原蛋白的合成和骨形成，并且采用雙抗體夾心法，利用吖啶酯瞬時發(fā)光及磁珠分離技術(shù)，并利用生物素?親和素體系級聯(lián)放大效應(yīng)。檢測結(jié)果準確度高、線性關(guān)系良好、穩(wěn)定性好、特異性強、靈敏度高，與Roche PINP分析產(chǎn)品的性能相比，具有更寬的線性范圍（0.5?1500ng/mL），檢測范圍廣，并且具有抗干擾性，可以更有效地滿足臨床檢測試劑的要求。對于骨質(zhì)疏松的早期診斷、早期干預(yù)以及預(yù)后可以提供可靠的臨床參考價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測血清中完整PINP的化學(xué)發(fā)光定量檢測試劑盒。

背景技術(shù)

骨骼是一種動態(tài)組織，在整個生命過程中通過吸收和形成不斷進行重塑，以維持鈣的穩(wěn)態(tài)和骨骼質(zhì)量。骨質(zhì)疏松(Osteoporosis，OP)是由于骨骼和礦物質(zhì)的代謝紊亂導(dǎo)致骨骼微結(jié)構(gòu)的退化，導(dǎo)致骨密度減小、骨組織微結(jié)構(gòu)惡化骨脆性增加導(dǎo)致骨脆性增加和骨折風(fēng)險上升的全身性骨病。據(jù)統(tǒng)計，全球有約2億骨質(zhì)疏松患者，造成890萬人次的骨折，平均每3秒便會發(fā)生一起骨質(zhì)疏松引起的骨折，并呈逐年升高趨勢。隨著人口老齡化問題的加劇，骨質(zhì)疏松癥發(fā)生率已經(jīng)躍居常見慢性疾病的第三位。骨質(zhì)疏松越發(fā)成為嚴重的世界性健康問，其發(fā)病率較高，危害巨大。因此研發(fā)骨質(zhì)疏松發(fā)病的早期診斷對推動骨質(zhì)疏松發(fā)病的預(yù)防與治療方案的進步，提高人民健康水平，具有重要的社會意義。

目前，雙能X線骨密度儀檢測是公認的診斷骨質(zhì)疏松癥以及了解疾病進展的方法，還可以監(jiān)測治療效果，是目前使用最廣泛，也是能比較真實地反映骨骼狀態(tài)的檢查手段，被認為是骨質(zhì)疏松癥診斷金標準。但該方法需要特殊的儀器，成本高，且不能提供監(jiān)測所需的連續(xù)測量值。

骨代謝的生化標志物具有篩選骨轉(zhuǎn)化條件和監(jiān)測骨對治療的早期反應(yīng)的潛力，并為監(jiān)測骨質(zhì)疏松癥的治療提供基礎(chǔ)。生化標志物包括骨吸收和骨形成的標志物。骨吸收標記物是破骨細胞酶或膠原蛋白降解產(chǎn)物，釋放到循環(huán)中。骨形成標記是成骨細胞酶，I型膠原蛋白的合成或基質(zhì)蛋白產(chǎn)物的分解標記。其中，I型膠原是由成骨細胞合成的，作為I型膠原的前體，在羧基(C)和氨基(N)末端具有延伸肽。這些延伸在膠原蛋白的胞外代謝過程中被蛋白酶切割，產(chǎn)生完整的I型前膠原N端肽的n端(PINP)和c端(PICP)前肽。PINP和PICP以三聚體的形式存在于血液中，三聚體迅速轉(zhuǎn)化為單體，是I型膠原蛋白總合成的標志物。從前體分子I型前膠原蛋白水解而來的PICP可以通過生長激素和甲狀旁腺激素調(diào)節(jié)的甘露糖受體迅速被肝內(nèi)皮細胞清除。結(jié)果，PICP血清半衰期少于10分鐘，這限制了其作為生物標志物的用途。另一方面，盡管軟骨，牙本質(zhì)，皮膚和其他組織中的I型膠原蛋白很少，但是循環(huán)系統(tǒng)中的PINP主要來自骨骼形成過程。重要的是，除了不受食物攝入和晝夜節(jié)律的影響外，PINP還具有更長的血清穩(wěn)定性，使其成為定量PINP來衡量骨骼合成代謝活性的理想生物標志物分子。實際上，用于測量PINP濃度的血清測試方法已被批準用于骨質(zhì)疏松癥的臨床研究。目前，在中國只有商用診斷試劑盒，包括總PINP ECLIA(羅氏診斷公司)和用于總PINP測量的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)。

在血液循環(huán)系統(tǒng)中，PINP以各種形式存在，例如完整的三聚體PINP(完整的PINP)和單體或二聚體降解產(chǎn)物。研究發(fā)現(xiàn)，對于健康個體，完整性和總PINP測量結(jié)果之間具有良好的相關(guān)性。但是，當(dāng)腎功能下降時，完整性和總PINP的清除率可能會有所不同，因為完整的PINP主要由肝臟清除，而PINP的單體形式則由腎臟清除。在存在腎臟疾病的情況下，總的PINP值不能可靠地反映1型膠原蛋白的合成和骨形成，因此其診斷價值有限。此外，ELISA的靈敏度低，檢測范圍窄以及市售CLIA的高昂費用限制了這些診斷測試的臨床應(yīng)用。

基于現(xiàn)有技術(shù)中檢測骨質(zhì)疏松癥的手段的局限性，尋找一種準確有效的能夠在早期即可診斷骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的方法是亟待解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容