[發(fā)明專利]表達(dá)人源化抗體的非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011195339.3
• 申請(qǐng)日: 2009-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN112715482B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: F.G.格羅斯維爾德;R.W.詹森斯;M.J.范哈佩倫;羅杰·金登·克雷格
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伊拉茲馬斯大學(xué)鹿特丹醫(yī)學(xué)中心;羅杰·金登·克雷格
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85
• 代理公司: 北京睿陽聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11758
• 代理人: 張穎;王瑩

本發(fā)明涉及表達(dá)人源化抗體的非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其用途。本發(fā)明提供含有內(nèi)源λ輕鏈基因座、內(nèi)源κ輕鏈基因座和內(nèi)源重鏈基因座的非人哺乳動(dòng)物，每個(gè)基因座可重排使得在抗原攻擊后在B細(xì)胞中形成并表達(dá)免疫球蛋白重鏈和輕鏈基因，但是所述基因座已經(jīng)突變使得形成包含從所述突變基因座產(chǎn)生的重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能力大大降低或消除。

本申請(qǐng)為分案申請(qǐng)，原申請(qǐng)的申請(qǐng)日為2009年11月30日， 申請(qǐng)?zhí)枮?00980151815.7(PCT/GB2009/002781)，發(fā)明名稱為“表 達(dá)人源化抗體的非人轉(zhuǎn)基因動(dòng)物及其用途”。

發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及使用轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物響應(yīng)抗原攻擊而衍生和選 擇各種功能性親和力成熟四聚體免疫球蛋白(包含重鏈和輕鏈)庫的改 進(jìn)方法及其用途。

具體地講，本發(fā)明涉及經(jīng)過工程改造使得其產(chǎn)生小鼠內(nèi)源κ和/ 或λ輕鏈免疫球蛋白的能力大大降低或者輕鏈與重鏈復(fù)合的能力降 低、消除或被阻斷的非人哺乳動(dòng)物，優(yōu)選小鼠。本發(fā)明的非人哺乳動(dòng) 物產(chǎn)生小鼠功能性內(nèi)源重鏈的能力也下降。因此，其形成包含由所述 突變基因座產(chǎn)生的重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能 力已大大降低或消除。本發(fā)明還披露了產(chǎn)生這類哺乳動(dòng)物的方法以及 利用這類哺乳動(dòng)物使用免疫球蛋白重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生人四聚體 抗體和雜交四聚體抗體的方法。

在下面的說明中，所有氨基酸殘基的位置號(hào)根據(jù)由Kabat等人 ((1991)，美國(guó)公共衛(wèi)生署(US Public Health Services)出版物第91-3242 號(hào))設(shè)計(jì)的編號(hào)系統(tǒng)給出。

發(fā)明背景

抗體

抗體的結(jié)構(gòu)是本領(lǐng)域眾所周知的。大多數(shù)天然抗體是四聚體，包 含2條重鏈和2條輕鏈。重鏈通過大致位于每條重鏈中部的鉸鏈結(jié)構(gòu) 域之間的二硫鍵彼此連接。輕鏈在鉸鏈結(jié)構(gòu)域的N端側(cè)與各重鏈締 合。每條輕鏈通常通過接近鉸鏈結(jié)構(gòu)域的二硫鍵與其對(duì)應(yīng)的重鏈結(jié) 合。

當(dāng)抗體分子正確折疊時(shí)，每條鏈折疊成許多通過較為線性的多肽 序列連接的獨(dú)特的球狀結(jié)構(gòu)域。例如，輕鏈折疊成可變(V_L)結(jié)構(gòu)域和 恒定(C_κ或C_λ)結(jié)構(gòu)域。重鏈具有單個(gè)可變結(jié)構(gòu)域V_H、第一恒定結(jié)構(gòu) 域(C_H1)、鉸鏈結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)或三個(gè)另外的恒定結(jié)構(gòu)域。重鏈的恒定結(jié) 構(gòu)域和鉸鏈結(jié)構(gòu)域一起形成通常所稱的抗體重鏈恒定區(qū)。重(V_H)鏈和 輕(V_L)鏈可變結(jié)構(gòu)域的相互作用導(dǎo)致形成抗原結(jié)合區(qū)(Fv)。重鏈的C_H1 結(jié)構(gòu)域和輕鏈的C_κ或C_λ結(jié)構(gòu)域有利于重鏈和輕鏈的相互作用。一般 而言，抗原結(jié)合既需要V_H又需要V_L，但研究已表明重鏈二聚體和氨 基端片段在輕鏈不存在時(shí)保持活性(Jaton等(1968)Biochemistry，7，4185-4195)。通常循環(huán)λ輕鏈的比例低下，可能占血漿中復(fù)合成四聚 體免疫球蛋白的全部輕鏈的2-5％(Goldsby等(2003)Immunology，第 5版，W.H.FreemanCo NY)。