[發明專利]表達人源化抗體的非人轉基因動物及其用途

有效

• 申請號: 202011195339.3
• 申請日: 2009-11-30
• 公開（公告）號: CN112715482B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: F.G.格羅斯維爾德;R.W.詹森斯;M.J.范哈佩倫;羅杰·金登·克雷格
• 申請（專利權）人: 伊拉茲馬斯大學鹿特丹醫學中心;羅杰·金登·克雷格
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 張穎;王瑩

1.一種用于產生轉基因小鼠的方法，所述方法包括：

使小鼠祖細胞的內源重鏈基因座和內源κ輕鏈基因座突變，其中所述突變包括將移碼突變、多肽編碼序列或一個或多個終止密碼子引入各個基因座中，其中所述內源重鏈基因座的突變為引入終止密碼子；

由所述祖細胞產生小鼠，其具有降低或消除的形成包含從所述突變基因座產生的重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能力；和

將包含異源重鏈基因座和異源輕鏈基因座的轉基因基因座作為轉基因通過顯微注射引入受精卵中，所述受精卵由所述小鼠提供；

其中，所述轉基因小鼠包含：

(a)突變的內源重鏈基因座和突變的內源κ輕鏈基因座，其具有降低或消除的產生包含重排重鏈和輕鏈的功能性免疫球蛋白四聚體的能力，其中所述突變包括將移碼突變、多肽編碼序列或一個或多個終止密碼子引入各個基因座中，其中所述內源重鏈基因座的突變為引入終止密碼子；和

(b)(i)轉基因基因座，其包含異源κ輕鏈基因座和相關B細胞特異性調節元件；和/或

(b)(ii)轉基因基因座，其包含異源λ輕鏈基因座和相關B細胞特異性調節元件；和

(c)轉基因基因座，其包含一個或多個異源重鏈基因座，

其中所述異源輕鏈基因座包含含有VL和J區段的人可變區和大鼠恒定區，并且其中所述異源重鏈基因座包含含有一個或多個V基因區段、一個或多個J基因區段和一個或多個D基因區段的人可變區、大鼠恒定區和鼠來源的重鏈免疫球蛋白LCR。

2.權利要求1的方法，其中各個異源重鏈基因座包含10個或更多個V基因區段。

3.權利要求2的方法，其中各個異源重鏈基因座包含18個V基因區段。

4.權利要求3的方法，其中各個異源重鏈基因座包含5個大鼠恒定區和18個人VH區段6-1、1-2、4-4、2-5、3-07、1-8、4-39、3-15、1-18、3-23、3-30、3-33、3-48、4-34、3-49、3-53、4-59和1-69。

5.權利要求1的方法，其中所述終止密碼子在內源重鏈基因座的Cμ區的CH1結構域中。

6.權利要求1的方法，其中所述內源κ輕鏈基因座中的突變為引入移碼突變。

7.權利要求6的方法，其中所述移碼突變在內源κ輕鏈基因座的κ恒定區中。

8.權利要求1的方法，其中所述祖細胞是小鼠胚胎干細胞。