[發明專利]一種增強型溶瘤腺病毒及其應用

在審

• 申請號: 202011195219.3
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN114438128A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 周東明;周萍;張琰;朱彩紅
• 申請（專利權）人: 上海市公共衛生臨床中心
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/64;C12N7/01;A61K48/00;A61K35/761;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種制備溶瘤腺病毒載體的方法，包括以黑猩猩型腺病毒AdC68基因組為基礎的序列，且改造其E1序列、E3序列，所述改造包括：

(1)在E1區刪除E1B部分序列，且利用survivin啟動子驅動E1A的表達；和

(2)刪除E3區部分序列，且在E3區引入抗PD-1抗體的表達盒。

2.一種溶瘤腺病毒載體，包括以黑猩猩型腺病毒AdC68基因組為基礎的序列，其中E1序列、E3序列被改造，所述改造包括：

(1)在E1區刪除E1B部分序列，且利用survivin啟動子驅動E1A的表達；和

(2)刪除E3區部分序列，且在E3區引入抗PD-1抗體的表達盒。

3.如權利要求1或2所述，其特征在于，(1)中，E1序列的刪除區域為E1b 55k區域；較佳地為AdC68基因組第1907～3403位；

(2)中，E3序列的刪除區域為AdC68基因組第27619～31338位。

4.如權利要求1或2所述，其特征在于，(1)中，survivin啟動子為啟動子片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；和/或，E1A的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；或

(2)中，所述抗PD-1抗體的表達盒中，包括以下可操作性相連的元件：啟動子、信號肽編碼序列、抗PD-1抗體重鏈編碼序列、連接序列、抗PD-1抗體輕鏈編碼序列、終止子；

較佳地，在信號肽編碼序列與抗PD-1抗體重鏈編碼序列之間，還包括Kozak序列；

較佳地，所述啟動子包括CMV啟動子，CASI啟動子；

較佳地，所述信號肽為MHCI信號肽；更佳地，其核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

較佳地，輕鏈編碼序列與終止子之間還包括WPRE元件；更佳地WPRE元件的核苷酸序列為SEQ ID NO:4所示；

較佳地，所述連接序列為F2A。

5.權利要求2～4任一所述的溶瘤腺病毒載體的用途，用于組裝重組溶瘤腺病毒，該重組溶瘤腺病毒用于抑制腫瘤。

6.一種重組溶瘤腺病毒，其由權利要求2～4任一所述的溶瘤腺病毒載體包裝獲得。

7.一種制備權利要求6所述的重組溶瘤腺病毒的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)制備權利要求2～4任一所述的溶瘤腺病毒載體；

(b)將(a)的溶瘤腺病毒載體轉染病毒生產細胞，從而包裝獲得重組的溶瘤腺病毒。

8.權利要求6所述的重組溶瘤腺病毒的用途，其特征在于，用于表達溶瘤效應物，該溶瘤效應物可特異性靶向于腫瘤并抑制腫瘤；較佳地，所述腫瘤包括：結直腸癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、黑色素瘤、鼻咽癌、骨肉瘤、胰腺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、白血病、口腔癌、唾液腺腫瘤、鼻腔與鼻旁竇惡性腫瘤、喉癌、耳部腫瘤、眼部腫瘤、甲狀腺腫瘤、縱隔腫瘤、胸壁、胸膜腫瘤、小腸腫瘤、膽道腫瘤、胰腺與壺腹周圍腫瘤、腸系膜與腹膜后腫瘤、腎臟腫瘤、腎上腺腫瘤、膀胱腫瘤、前列腺癌、睪丸腫瘤、陰莖癌、子宮內膜癌、卵巢惡性腫瘤、惡性滋養細胞腫瘤、外陰癌與陰道癌、惡性淋巴瘤、多發性骨髓瘤、軟組織腫瘤、骨腫瘤、皮膚及附件腫瘤、神經系統腫瘤、小兒腫瘤；更佳地，所述腫瘤包括：結直腸癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、黑色素瘤；

較佳地，所述重組溶瘤腺病毒通過誘導腫瘤細胞自噬而誘導腫瘤凋亡；或通過誘導caspase3激活、p53激活、阻滯細胞周期而抑制腫瘤。

9.一種抗腫瘤的藥物組合物或藥盒，其特征在于，所述的藥物組合物或藥盒中含有：

有效量的權利要求6所述的重組溶瘤腺病毒；和

藥學上可接受的載體。

10.一種用于制備溶瘤腺病毒的試劑盒，其特征在于，包括：

權利要求2～5任一所述的溶瘤腺病毒載體；

病毒生產細胞。