[發明專利]高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法

在審

• 申請號: 202011192793.3
• 申請日: 2020-10-30
• 公開（公告）號: CN112391350A
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 于紅陽;申陽陽;王紅麗;胡桂珍;楊仲璠;徐明波
• 申請（專利權）人: 北京雙鷺藥業股份有限公司;北京雙鷺立生醫藥科技有限公司;北京雙鷺生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/071;C07K16/28
• 代理公司: 北京知呱呱知識產權代理有限公司 11577
• 代理人: 孫志一

1.一種高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述方法包括：將重組抗EGFR單克隆抗體的種子細胞復蘇，在Actipro基礎培養基中放大培養后得到種子細胞培養懸液，將所述種子細胞培養懸液發酵培養，定期流加補料培養基和葡萄糖溶液，培養至細胞活率低于80％，收獲發酵培養細胞，得到所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞。

2.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述發酵培養條件為：

在生物反應器中培養，初期培養溫度為37℃，pH值為7.0～7.2，培養液的溶氧量為40％～60％，轉速為150-250rpm，從發酵培養的96±2h開始，將培養溫度調至32-34℃，并添加補料培養基，發酵時間為13-15天，得到細胞培養發酵液。

3.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述補料培養基為CellBoost 7a/7b。

4.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述流加補料培養基是在發酵培養第4-12天中，隔天流加，流加次數為4-5次，流加比例為3-5％。

5.如權利要求4所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述流加補料培養基的流加次數為5次，第4、6、8、10、12d分別流加初始細胞培養液體積的3％、4％、5％、4％、3％。

6.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述葡萄糖溶液的流加量為保持所述發酵液中葡萄糖的質量濃度為2-8g/L。

7.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述種子細胞培養懸液制備過程為：

將重組抗EGFR單克隆抗體的種子細胞取出后，在37℃水浴融化，離心留取沉淀，用基礎培養基重懸培養；

其中，培養箱的轉速100rpm，溫度為37℃，空氣中CO₂體積濃度為5％，每隔48-72h進行傳代培養，經過2級傳代培養后，得到所述種子細胞培養懸液。

8.如權利要求1所述高效表達抗EGFR單克隆抗體細胞的篩選培養方法，其特征在于，

所述發酵培養過程中，發酵培養開始時，所述種子細胞培養液的細胞密度為0.5-1.0×10⁶個/mL。