[發明專利]一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011186673.2
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112111609A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 趙百慧;楊孫孝;李春明;向軍喜
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 上海樂泓專利代理事務所(普通合伙) 31385
• 代理人: 蘇杰

本發明的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒及其使用方法，試劑盒包括核酸擴增反應液、酶混合液、腸道病毒通用型反應液、陽性對照和陰性對照，所述腸道病毒通用型反應液設有內參。陽性對照參與提取和RT?PCR擴增的過程，監控提取和擴增過程。內參可用于對樣本采集、保存和運輸以及核酸提取過程進行監控，避免假陰性判讀結果的出現。

技術領域

本發明屬于核酸檢測技術領域，具體來說是一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒。

背景技術

腸道病毒屬于小RNA病毒科腸道病毒屬，能引起人類致病的腸道病毒有多種，引起的主要疾病有手足口病、無菌性腦膜炎等。手足口病5歲以下兒童為主，尤以3歲以下兒童發病率最高，該病流行無明顯的地區性，全年均可發生，一般5-7月為發病高峰。引起手足口病的腸道病毒包括柯薩奇病毒A組的2、4、5、6、7、9、10、16型等，B組的1、2、3、4、5型等，腸道病毒71型及?？刹《镜取Ｓ捎谶@些病毒引起的癥狀和流行特點相似，僅靠臨床癥狀對病原進行區分非常不可靠，實驗室診斷方法有病毒分離、抗原檢測與核酸檢測等。

經過檢索，中國發明專利：一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒及其檢測方法(申請號為201010105091.7，申請日為2010.02.02)，該申請案試劑盒含有：PCR反應酶，其中包括熱啟動Taq酶、MLV逆轉錄酶、RNA酶抑制劑；PCR反應液，其中包括DEPC處理水、dNTPs、10×PCRBuffer、腸道病毒通用型正向引物、腸道病毒通用型反向引物、腸道病毒通用型探針；腸道病毒通用型正向引物序列為：5’-GTGTCGTAAYGGGYAACTCTGCA-3’，腸道病毒通用型反向引物序列為：5’-YAATTGTCACCATAAGCAGCCA-3’，腸道病毒通用型探針序列為：5’-TAGAACCGACTACTTACGGTGTCCGT-3’；陰性質控品，為DEPC處理水；陽性質控品，為制備的體外轉錄RNA。采用實時熒光定量PCR技術檢測總腸道病毒核酸序列的方法，具有特異、靈敏、快速、操作簡便的優點。但是該申請案的不足之處在于沒有設置內參，對于反應的質量難以把控。

發明內容

1.發明要解決的技術問題

本發明的目的在于解決現有的腸道病毒核酸檢測試劑盒沒有設置內參，對于反應的質量難以把控的問題。

2.技術方案

為達到上述目的，本發明提供的技術方案為：

本發明的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，包括核酸擴增反應液、酶混合液、腸道病毒通用型反應液、陽性對照和陰性對照，所述腸道病毒通用型反應液設有內參。

優選的，所述核酸擴增反應液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

優選的，所述酶混合液包括UNG酶5U/μL、DNA聚合酶2.5U/μL、逆轉錄酶200U/μL、RNA酶抑制劑40U/μL和酶稀釋液。

優選的，所述腸道病毒通用型反應液包括腸道病毒通用型上游引物、腸道病毒通用型下游引物、腸道病毒通用型探針、內參RNase P上游引物、內參RNase P下游引物、內參RNase P探針和DEPC水。

優選的，所述陽性對照包括腸道病毒通用型病毒樣顆粒、RNase P病毒樣顆粒和TEBuffer，所述陰性對照為0.9％的氯化鈉溶液。

優選的，所述腸道病毒通用型上游引物序列為CTTTGGGTGTCCGTGTTTCC，腸道病毒通用型下游引物序列為GGCCAATCCAATAGCTATATGG，腸道病毒通用型探針序列為AATTCTTTAATTGTCACCATAAGCAGCCAATA。