[發明專利]一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011186673.2
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112111609A
• 公開（公告）日: 2020-12-22
• 發明（設計）人: 趙百慧;楊孫孝;李春明;向軍喜
• 申請（專利權）人: 上海伯杰醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12R1/93
• 代理公司: 上海樂泓專利代理事務所(普通合伙) 31385
• 代理人: 蘇杰

1.一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：包括核酸擴增反應液、酶混合液、腸道病毒通用型反應液、陽性對照和陰性對照，所述腸道病毒通用型反應液設有內參。

2.根據權利要求1所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述核酸擴增反應液包括核苷酸混合液、Buffer、MgCl₂溶液和DEPC水。

3.根據權利要求1所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述酶混合液包括UNG酶5U/μL、DNA聚合酶2.5U/μL、逆轉錄酶200U/μL、RNA酶抑制劑40U/μL和酶稀釋液。

4.根據權利要求1所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述腸道病毒通用型反應液包括腸道病毒通用型上游引物、腸道病毒通用型下游引物、腸道病毒通用型探針、內參RNase P上游引物、內參RNase P下游引物、內參RNase P探針和DEPC水。

5.根據權利要求1所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照包括腸道病毒通用型病毒樣顆粒、RNase P病毒樣顆粒和TE Buffer，所述陰性對照為0.9％的氯化鈉溶液。

6.根據權利要求4所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述腸道病毒通用型上游引物序列為CTTTGGGTGTCCGTGTTTCC，腸道病毒通用型下游引物序列為GGCCAATCCAATAGCTATATGG，腸道病毒通用型探針序列為AATTCTTTAATTGTCACCATAAGCAGCCAATA。

7.根據權利要求4所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒，其特征在于：所述內參RNase P上游引物的序列為FAGATTTGGACCTGCGAGCG，所述內參RNase P下游引物的序列為RGAGCGGCTGTCTCCACAAGT，所述內參RNase P探針的序列為PTTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

8.一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括如下步驟：

S100、預處理，分別取出核酸擴增反應液、酶混合液、腸道病毒通用型反應液、陽性對照和陰性對照，并在室溫下融化，充分振蕩混勻后瞬間離心；

S200、配置反應液并放在PCR反應管中，每個PCR反應管中20μL；

S300、提取核酸；

S400、加樣，在步驟S200配置的反應液中分別加入待測樣本、陽性對照和陰性對照核酸各5μL，蓋緊管蓋，瞬時離心；

S500、擴增檢測，將步驟S400得到的PCR反應管放置在熒光定量PCR儀中進行擴增檢測；

S600、結合內參檢測結果判斷樣本檢測結果。

9.根據權利要求8所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于：所述步驟S200中的配置反應液為核酸擴增反應液12μL/人份、酶混合液4μL/人份、腸道病毒通用型反應液4μL/人份。

10.根據權利要求8所述的一種腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，所述步驟S500中的熒光定量PCR儀的擴增檢測循環參數如下：

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