[發明專利]一種基于單克隆抗體制備的鐵調素的膠乳增強比濁法檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011184220.6
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112345772A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 卞正虹;王斌;李秀艷
• 申請（專利權）人: 江蘇沃興生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531;C07K16/26
• 代理公司: 南京創略知識產權代理事務所(普通合伙) 32358
• 代理人: 呂娟

本發明公開一種基于單克隆抗體制備的鐵調素（HEPCIDIN）的膠乳增強比濁法檢測試劑盒，其含有交聯混合HEPCIDIN 1?3單克隆抗體的膠乳微球，所述交聯混合HEPCIDIN1?3單克隆抗體的膠乳微球為將人HEPCIDIN蛋白基因序列切割為三段，分別通過表達載體導入表達菌中進行表達；然后將表達產物純化和鑒定后免疫小鼠，待免疫達到指定抗體水平后無菌取脾臟，制備雜交瘤細胞；培養篩選雜交瘤，獲得三種HEPCIDIN單克隆抗體，然后分別將該三種HEPCIDIN單克隆抗體與聚苯乙烯膠乳微球交聯而成。與現有技術相比，本發明自制了三株單克隆抗體交聯到膠乳微球上，形成膠乳增強免疫比濁法試劑盒，使用其測定鐵調素，可在全自動生化分析儀上使用，成本低廉且自動化高，節省檢測時間，提升了鐵調素檢測的應用價值。

技術領域

本發明涉及一種基于單克隆抗體制備的鐵調素的膠乳增強比濁法檢測試劑盒。

背景技術

抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原刺激所產生的抗體稱之為單克隆抗體，通常采用雜交瘤技術來制備。雜交瘤抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。用具備這種特性的單個雜交瘤細胞培養成細胞群，可制備針對一種抗原表位的特異性抗體即單克隆抗體。

鐵調素(HEPCIDIN)是一種25氨基酸肽，具有抗菌肽的特性，是組織對鐵的吸收和分配的主要調節者，其表達受機體信號因子以及炎癥、低氧等疾病狀態的影響。2000年由Krause等和Park等分別從人血清和尿中提純得到鐵調素。研究證實，鐵調素基因發生突變引起其體內表達下降將導致嚴重的鐵超載，進而形成血色病。Nemeth等和Lim等的研究表明，通過使鐵調素的受體FPN1表達降低并導致其降解，可抑制鐵向細胞外的釋放。因此目前認為，鐵調素是主要的鐵調節激素，炎癥性貧血的關鍵調節劑、鐵代謝和固有免疫之間聯系的橋梁，在機體鐵代謝平衡的調節中起關鍵作用，臨床上可作為一個中間指標參考使用。

目前監測鐵調素的方法是質譜檢測法。該方法檢測成本高，儀器專業度要求高，操作過程時間長，樣本量有限，難以在臨床推廣使用。

膠乳增強比濁法是近年來出現的一種較為穩定、準確的均相免疫比濁檢測方法。膠乳增強比濁法是在高分子膠乳微球的表面交聯抗體，當交聯有抗體的微球與抗原結合后，在短時間內會迅速聚集在一起，改變了反應液透光性能(即吸光度)。而且，反應液透光性能的改變與被測抗原的濃度有較強的相關性，在一定范圍內可以反映被測抗原的濃度。膠乳增強比濁法是在均相反應體系中進行抗原、抗體反應及結果的測定?？乖⒖贵w反應后，直接測定反應液的吸光度值，幾分鐘就能獲得結果，成本低且省時省力。此外，該方法可以在大型全自動生化儀上使用，不需要添置額外的設備。膠乳增強比濁法操作步驟的簡化也相應地避免了許多人為操作因素和試劑、環境等外界因素的干擾，穩定性和重復性都較好，能較真實地反映被測物質的含量。

發明內容

針對HEPCIDIN抗原性較差，HEPCIDIN現有檢測方法學時間過長，檢測量過小，檢測成本高無法在臨床推廣的問題，本發明提供一種基于單克隆抗體制備的鐵調素的膠乳增強比濁法檢測試劑盒，采用融合蛋白增強抗原性，實現膠乳增強比濁檢測HEPCIDIN，代替質譜檢測方法，提高檢測效率，擴大檢測樣本量。具體技術方案如下：