[發(fā)明專利]一種檢測(cè)二氟潑尼酯眼用乳劑中的降解雜質(zhì)及其含量的高效液相色譜方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011182808.8
• 申請(qǐng)日: 2020-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN112305115B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 文路喬;宋德蘭;徐欣;葉翔;莊昌萌
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 諾峰藥業(yè)（成都）有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種檢測(cè)二氟潑尼酯眼用乳劑中降解雜質(zhì)的高效液相色譜方法，其特征在于，所述降解雜質(zhì)包括6α,9α-二氟潑尼松龍、6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯，

所述6α,9α-二氟潑尼松龍的結(jié)構(gòu)為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯的結(jié)構(gòu)為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯的結(jié)構(gòu)為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯的結(jié)構(gòu)為：

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯的結(jié)構(gòu)為：；

包括以下操作步驟：

（1）樣品溶液的制備：取待檢二氟潑尼酯眼用乳劑，加溶劑溶解配制樣品溶液；

（2）將樣品溶液注入高效液相色譜儀檢測(cè)，色譜條件如下：

色譜柱：C18色譜柱；色譜柱規(guī)格為內(nèi)徑4.6mm，長度150mm，填料粒徑3.5μm；

流動(dòng)相：流動(dòng)相A為乙酸銨溶液，所述乙酸銨溶液的濃度為0.01~0.03 mol/L，pH為3~4；流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫，洗脫程序如下：

洗脫時(shí)間0min，25%~35%的流動(dòng)相B；

洗脫時(shí)間6min，25%~35%的流動(dòng)相B；

洗脫時(shí)間25min，40%~50%的流動(dòng)相B；

洗脫時(shí)間35min，40%~50%的流動(dòng)相B；

洗脫時(shí)間40min，25%~35%的流動(dòng)相B；

洗脫時(shí)間50min，25%~35%的流動(dòng)相B；

柱溫為25~35℃，流速為0.5~1.5 mL/min，檢測(cè)波長為254nm。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，還包括以下檢測(cè)二氟潑尼酯眼用乳劑中降解雜質(zhì)含量的操作步驟：

（3）標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備：稱取二氟潑尼酯標(biāo)準(zhǔn)品，加與樣品溶液相同的溶劑溶解配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

（4）將標(biāo)準(zhǔn)品溶液按照與步驟（2）相同的方法注入高效液相色譜儀檢測(cè)；

（5）根據(jù)檢測(cè)結(jié)果計(jì)算得到二氟潑尼酯眼用乳劑中5種降解雜質(zhì)的含量，計(jì)算公式如下：

含量%

其中，Aspl為測(cè)得的樣品溶液的峰面積；

Astd為標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)測(cè)量5次的峰面積的平均值；

Wstd為標(biāo)準(zhǔn)品溶液中二氟潑尼酯的質(zhì)量，以mg計(jì)；

Dstd為標(biāo)準(zhǔn)品溶液的稀釋倍數(shù)；

Dspl為樣品溶液的稀釋倍數(shù)；

L為樣品溶液的標(biāo)示量，以mg計(jì)；

P為二氟潑尼酯標(biāo)準(zhǔn)品的純度以mg/mg計(jì)；

RRF是雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）所述溶劑為乙腈。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述乙酸銨溶液的濃度為0.02mol/L，pH為3.5。

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述色譜柱型號(hào)為 SVEA C18Cold色譜柱。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述梯度洗脫程序?yàn)椋?/p>

洗脫時(shí)間0min，30%的流動(dòng)相B

洗脫時(shí)間6min，30%的流動(dòng)相B

洗脫時(shí)間25min，45%的流動(dòng)相B

洗脫時(shí)間35min，45%的流動(dòng)相B

洗脫時(shí)間40min，30%的流動(dòng)相B

洗脫時(shí)間50min，30%的流動(dòng)相B。

7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀樣品盤溫度為5℃，所述柱溫為30℃；流速為1.0 mL/min。

8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中的樣品溶液進(jìn)樣量為5~15μL。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟（2）中的樣品溶液進(jìn)樣量為10μL。

10.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述雜質(zhì)的相對(duì)響應(yīng)因子的值如下：

6α,9α-二氟潑尼松龍的相對(duì)響應(yīng)因子為：1.41；

6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯的相對(duì)響應(yīng)因子為：1.22；

6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯的相對(duì)響應(yīng)因子為：1.26；

6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯的相對(duì)響應(yīng)因子為：1.05；

6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯的相對(duì)響應(yīng)因子為：1.12。