[發明專利]一種檢測二氟潑尼酯眼用乳劑中的降解雜質及其含量的高效液相色譜方法

有效

• 申請號: 202011182808.8
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112305115B
• 公開（公告）日: 2022-08-23
• 發明（設計）人: 文路喬;宋德蘭;徐欣;葉翔;莊昌萌
• 申請（專利權）人: 諾峰藥業（成都）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種檢測二氟潑尼酯眼用乳劑中降解雜質的高效液相色譜方法，其特征在于，所述降解雜質包括6α,9α-二氟潑尼松龍、6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯、6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯，

所述6α,9α-二氟潑尼松龍的結構為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯的結構為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯的結構為：；

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯的結構為：

所述6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯的結構為：；

包括以下操作步驟：

（1）樣品溶液的制備：取待檢二氟潑尼酯眼用乳劑，加溶劑溶解配制樣品溶液；

（2）將樣品溶液注入高效液相色譜儀檢測，色譜條件如下：

色譜柱：C18色譜柱；色譜柱規格為內徑4.6mm，長度150mm，填料粒徑3.5μm；

流動相：流動相A為乙酸銨溶液，所述乙酸銨溶液的濃度為0.01~0.03 mol/L，pH為3~4；流動相B為乙腈，梯度洗脫，洗脫程序如下：

洗脫時間0min，25%~35%的流動相B；

洗脫時間6min，25%~35%的流動相B；

洗脫時間25min，40%~50%的流動相B；

洗脫時間35min，40%~50%的流動相B；

洗脫時間40min，25%~35%的流動相B；

洗脫時間50min，25%~35%的流動相B；

柱溫為25~35℃，流速為0.5~1.5 mL/min，檢測波長為254nm。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括以下檢測二氟潑尼酯眼用乳劑中降解雜質含量的操作步驟：

（3）標準品溶液的制備：稱取二氟潑尼酯標準品，加與樣品溶液相同的溶劑溶解配制標準品溶液；

（4）將標準品溶液按照與步驟（2）相同的方法注入高效液相色譜儀檢測；

（5）根據檢測結果計算得到二氟潑尼酯眼用乳劑中5種降解雜質的含量，計算公式如下：

含量%

其中，Aspl為測得的樣品溶液的峰面積；

Astd為標準品溶液重復測量5次的峰面積的平均值；

Wstd為標準品溶液中二氟潑尼酯的質量，以mg計；

Dstd為標準品溶液的稀釋倍數；

Dspl為樣品溶液的稀釋倍數；

L為樣品溶液的標示量，以mg計；

P為二氟潑尼酯標準品的純度以mg/mg計；

RRF是雜質的相對響應因子。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（1）所述溶劑為乙腈。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述乙酸銨溶液的濃度為0.02mol/L，pH為3.5。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2）中所述色譜柱型號為 SVEA C18Cold色譜柱。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述梯度洗脫程序為：

洗脫時間0min，30%的流動相B

洗脫時間6min，30%的流動相B

洗脫時間25min，45%的流動相B

洗脫時間35min，45%的流動相B

洗脫時間40min，30%的流動相B

洗脫時間50min，30%的流動相B。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀樣品盤溫度為5℃，所述柱溫為30℃；流速為1.0 mL/min。

8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中的樣品溶液進樣量為5~15μL。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟（2）中的樣品溶液進樣量為10μL。

10.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述雜質的相對響應因子的值如下：

6α,9α-二氟潑尼松龍的相對響應因子為：1.41；

6α,9α-二氟潑尼松龍-17-乙酸酯的相對響應因子為：1.22；

6α,9α-二氟潑尼松龍-21-乙酸酯的相對響應因子為：1.26；

6α,9α-二氟潑尼松龍-17-丁酸酯的相對響應因子為：1.05；

6α,9α-二氟潑尼松龍-21-丁酸酯的相對響應因子為：1.12。