[發(fā)明專利]油酸水合酶突變體及其在制備10-羥基硬脂酸中的應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011182795.4 | 申請日： | 2020-10-29 |
| 公開（公告）號： | CN112226428B | 公開（公告）日： | 2022-11-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 潘江;孫啟帆;許建和;陳琦;錢小龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 華東理工大學(xué);蘇州百福安酶技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12N15/60;C12P7/6409 |
| 代理公司： | 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明偉 |
| 地址： | 200237 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 油酸 水合 突變體 及其 制備 10 羥基 硬脂 中的 應(yīng)用 | ||
1.一種油酸水合酶突變體，其特征在于，其是由下述任一氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)：
(1) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸；
(2) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸；
(3) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第622位谷氨酸替換為甘氨酸；
(4) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為丙氨酸；
(5) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為絲氨酸；
(6) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為天冬酰胺；
(7) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為甘氨酸；
(8) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為半胱氨酸；
(9) 將如SEQ ID No. 2所示氨基酸序列的第233位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第122位苯丙氨酸替換為亮氨酸，第15位蘇氨酸替換為異亮氨酸。
2.一種分離的核酸，其特征在于，所述核酸編碼如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體。
3.一種重組表達(dá)載體，其特征在于，所述重組表達(dá)載體包含如權(quán)利要求2所述核酸。
4.一種重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，其特征在于，所述重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體包含如權(quán)利要求3所述重組表達(dá)載體。
5.一種重組油酸水合酶突變體催化劑，其特征在于，是以下形式中的任意一種：
(1) 培養(yǎng)如權(quán)利要求4所述重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，分離含有如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體的轉(zhuǎn)化體細(xì)胞；
(2) 培養(yǎng)如權(quán)利要求4所述重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，分離含有如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體的粗酶液；
(3) 培養(yǎng)如權(quán)利要求4所述重組表達(dá)轉(zhuǎn)化體，分離含有如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體的粗酶液，將所述油酸水合酶突變體的粗酶液干燥得到的粗酶粉。
6.一種如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體或如權(quán)利要求5所述重組油酸水合酶突變體催化劑在制備10-羥基硬脂酸中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：
使用如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體或如權(quán)利要求5所述重組油酸水合酶突變體催化劑，催化底物油酸的水合反應(yīng)制備10-羥基硬脂酸。
7.一種如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體或如權(quán)利要求5所述重組油酸水合酶突變體催化劑在制備10-羰基硬脂酸中的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：
(1) 使用如權(quán)利要求1所述油酸水合酶突變體或如權(quán)利要求5所述重組油酸水合酶突變體催化劑，催化底物油酸的水合反應(yīng)制備10-羥基硬脂酸；
(2) 使用如SEQ ID No. 3所示氨基酸序列的10-羥基硬脂酸脫氫酶催化步驟(1)的反應(yīng)產(chǎn)物10-羥基硬脂酸氧化生成10-羰基硬脂酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于：10-羥基硬脂酸脫氫酶催化10-羥基硬脂酸氧化生成10-羰基硬脂酸的反應(yīng)需要輔酶NAD+的參與，反應(yīng)過程中NAD+轉(zhuǎn)化生成NADH，將該反應(yīng)與NADH氧化酶催化的氧氣還原反應(yīng)耦聯(lián)，使輔酶NADH氧化再生NAD+。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：輔酶NAD+的濃度為0.1-0.5 mM。
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