[發(fā)明專利]一種能顯著提升青稞品種喜馬拉22小孢子愈傷產(chǎn)量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011179217.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-29
• 公開（公告）號(hào): CN112273230B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭桂梅;李穎波;劉成洪;宗營(yíng)杰;何婷;陸瑞菊;陳志偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01H6/46
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 李陽(yáng)

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種能顯著提升青稞品種“喜馬拉22”小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法，是在“喜馬拉22”小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)添加大麥品種“花30”的子房。本發(fā)明通過在“喜馬拉22”小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加一定數(shù)量組培特性優(yōu)良的大麥品種“花30”的子房，最終其愈傷產(chǎn)量較未添加子房的青稞小孢子有極顯著的提升；本發(fā)明為“喜馬拉22”小孢子高效再生，青稞單倍體育種提供了切實(shí)、有效的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是一種能顯著提升青稞品種“喜馬拉22”小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法。

背景技術(shù)

青稞是我國(guó)青藏高原地區(qū)重要的糧食作物，也是藏區(qū)同胞的主糧，同時(shí)還是優(yōu)良飼料和釀酒原料，在我國(guó)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中具有重要地位。青稞優(yōu)良品種的選育關(guān)系我國(guó)邊疆地區(qū)的糧食安全和藏族同胞的生活水平的改善，具有重要的政治意義和社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。隨著人們對(duì)健康的重視和膳食結(jié)構(gòu)的多元化，青稞由于其獨(dú)特的高原生態(tài)生產(chǎn)環(huán)境及其優(yōu)異的營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值，也正在由一個(gè)區(qū)域性口糧作物轉(zhuǎn)變?yōu)槿蛐越】凳吃醋魑铮找媸艿疥P(guān)注。因此，在青稞上建立高效的遺傳改良技術(shù)對(duì)于青稞遺傳改良具有重要意義。

植物小孢子(microspore)培養(yǎng)屬于單細(xì)胞起源、單倍體生殖細(xì)胞培養(yǎng)體系，通過染色體加倍植株形狀可以快速純合、穩(wěn)定下來，同時(shí)也可以獲得高頻再生植株。目前，在煙草、油菜、玉米、辣椒等多種作物中都已建立起成熟的游離小孢子培養(yǎng)體系。本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)在大麥品種“花30”上建立了高效體系，并以大麥小孢子高效再生體系為基礎(chǔ)，建立了青稞小孢子再生體系。小孢子誘導(dǎo)愈傷產(chǎn)量是決定小孢子高頻再生的關(guān)鍵因素。我們發(fā)現(xiàn)，青稞小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)實(shí)際操作時(shí)，青稞小孢子誘導(dǎo)愈傷產(chǎn)量和小孢子高頻再生大麥材料相比仍有顯著差異，這直接影響青稞小孢子后期再生頻率。因此，研究如何提高青稞小孢子誘導(dǎo)愈傷產(chǎn)量對(duì)于改進(jìn)青稞小孢子再生技術(shù)體系至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)上的缺陷，針對(duì)西藏優(yōu)良青稞品種“喜馬拉22”，提供一種能顯著提升“喜馬拉22”小孢子愈傷產(chǎn)量的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種能顯著提升青稞品種“喜馬拉22”小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法，是在“喜馬拉22”小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)添加大麥品種“花30”的子房。

進(jìn)一步的，每皿(3×1.5cm)小孢子在培養(yǎng)開始時(shí)按0.4-0.8個(gè)/cm²放置“花30”的子房。優(yōu)選0.4個(gè)/cm²放置人工去雄2天的“花30”的子房。

進(jìn)一步的，取人工去雄2天的大麥品種“花30”子房，“喜馬拉22”每皿小孢子在培養(yǎng)開始時(shí)每皿按0.4個(gè)/cm²放置子房，暗培養(yǎng)至20天。

進(jìn)一步的，所述的“喜馬拉22”小孢子培養(yǎng)方法為：

選取植株幼穗中部小花小孢子發(fā)育處于單核早-中期的“喜馬拉22”穗子，剪去葉片，保留上部?jī)善~子基部約1.5cm，放入4℃冰箱中進(jìn)行2～4周低溫預(yù)處理；經(jīng)過低溫預(yù)處理的“喜馬拉22”取花苞游離小孢子，每個(gè)試管接4個(gè)穗子的花苞，加入12ml提取液(甘露醇60g/L+CaCl₂ 1.1g/L+MES 0.976g/L+秋水仙堿20mg/L，pH 5.8)，用高速分散器超速旋切；把旋切好的懸浮液，用300目篩網(wǎng)過濾，濾液以700rpm，5min低速離心，重復(fù)3次，收集小孢子；收集到的小孢子用提取液于25℃、黑暗中預(yù)處理2d后再純化培養(yǎng)小孢子；培養(yǎng)前小孢子用誘導(dǎo)培養(yǎng)基(N6培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，鐵鹽加倍，添加90g/L麥芽糖、0.5mg/L KT、1.0mg/L2,4-D、0.976g/L MES、400mg/L水解干酪素、1600mg/L谷氨酰胺，pH5.8)洗滌1次，密度調(diào)節(jié)至1.0×10⁵個(gè)/m1，混勻后取1.5ml(約1.5×10⁵個(gè))小孢子懸浮液接種于培養(yǎng)皿(30×15mm)中，Parafilm封口，25℃，暗培養(yǎng)。