[發(fā)明專利]一種能顯著提升青稞品種喜馬拉22小孢子愈傷產(chǎn)量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011179217.5
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112273230B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭桂梅;李穎波;劉成洪;宗營杰;何婷;陸瑞菊;陳志偉
• 申請（專利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01H6/46
• 代理公司: 上海申浩律師事務(wù)所 31280
• 代理人: 李陽

1.一種能顯著提升青稞品種喜馬拉22小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法，其特征在于，是在喜馬拉22小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加大麥品種花30的子房；取人工去雄2天的大麥品種花30子房，喜馬拉22每皿小孢子在培養(yǎng)開始時(shí)按照0.4個/cm²放置子房，暗培養(yǎng)至20天；所述的小孢子誘導(dǎo)培養(yǎng)基以N6培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，鐵鹽加倍，添加90 g/L麥芽糖、0.5 mg/L KT、1.0 mg/L 2,4-D、0.976 g/L MES、400 mg/L水解干酪素、1600 mg/L谷氨酰胺，pH5.8；小孢子提取液為：甘露醇60 g/L+ CaCl₂ 1.1 g/L + MES 0.976g/L +秋水仙堿20 mg/L，pH 5.8。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提升青稞品種喜馬拉22小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述的喜馬拉22小孢子培養(yǎng)方法為：

選取植株幼穗中部小花小孢子發(fā)育處于單核早-中期的喜馬拉22穗子，剪去葉片，保留上部兩片葉子基部1.5 cm，放入4℃冰箱中進(jìn)行2～4周低溫預(yù)處理；取經(jīng)過低溫預(yù)處理的喜馬拉22的花苞游離小孢子，每個試管接4個穗子的花苞，加入12 ml提取液，用高速分散器超速旋切；把旋切好的懸浮液，用300目篩網(wǎng)過濾，濾液以700 rpm，5 min低速離心，重復(fù)3次，收集小孢子；收集到的小孢子用提取液于25℃、黑暗中預(yù)處理2 d后再純化培養(yǎng)小孢子；培養(yǎng)前小孢子用誘導(dǎo)培養(yǎng)基洗滌1次，密度調(diào)節(jié)至1.0×10⁵個/m1，混勻后取1.5 ml小孢子懸浮液接種于3×1.5 cm培養(yǎng)皿中，Parafilm封口，25℃，暗培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提升青稞品種喜馬拉22小孢子培養(yǎng)愈傷產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述的喜馬拉22植株培養(yǎng)方法為：青稞品種喜馬拉22在加濾紙的15cm培養(yǎng)皿浸泡至露白，萌發(fā)種子移至4℃冰箱，低溫處理30天；低溫處后移植于人工氣候室，植株培養(yǎng)條件為：溫度晚上18℃，白天20℃；濕度65%；12小時(shí)光照，12小時(shí)黑暗。