[發(fā)明專利]一種同時測定血漿中6種一線抗結(jié)核藥物及抗真菌藥物伏立康唑血藥濃度的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011178860.6
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112326824A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙冠人;陳明;車玲;彭明麗;孟瑾;吳漫
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍總醫(yī)院第八醫(yī)學(xué)中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 黃燕

本發(fā)明公開了一種同時測定血漿中6種一線抗結(jié)核藥物及抗真菌藥物伏立康唑血藥濃度的方法，涉及臨床血藥濃度監(jiān)測控制技術(shù)領(lǐng)域。該方法采用HPLC?MS/MS方法，其以對乙酰氨基酚為內(nèi)標(biāo)，血漿先經(jīng)甲醇沉淀蛋白后，經(jīng)HPLC按照特定的流動相在特定的梯度洗脫條件下進行洗脫分離，然后進入質(zhì)譜系統(tǒng)，采用多反應(yīng)監(jiān)測分析，實現(xiàn)同時對7種抗生素血藥濃度的精確定量。本方法特異性強，靈敏度高，精密度和準(zhǔn)確度良好、穩(wěn)定性好、提取回收率高、無明顯基質(zhì)效應(yīng)，操作簡單，方便快捷。本發(fā)明方法可實現(xiàn)對結(jié)核患者臨床樣本的高通量測定，指導(dǎo)臨床個體化用藥。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及臨床血藥濃度監(jiān)測控制技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種同時測定血漿中6種一線抗結(jié)核藥物及抗真菌藥物伏立康唑血藥濃度的方法。

背景技術(shù)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的慢性呼吸道傳染病，結(jié)核病的預(yù)防和治療主要依賴于針對結(jié)核分枝桿菌的長期聯(lián)合化療，一線抗結(jié)核藥如異煙肼、利福平、利福噴丁、乙胺丁醇、吡嗪酰胺等在結(jié)核病的治療中占據(jù)主導(dǎo)地位。另外氟喹諾酮類抗生素的抗結(jié)核菌活性也日益受到重視，其代表藥物左氧氟沙星在結(jié)核病的治療實踐中收到了良好的效果。這些抗結(jié)核藥物屬于濃度依賴型抗生素，其血藥濃度過低起不到殺菌效果，甚至導(dǎo)致耐藥，血藥濃度過高則會引起嚴(yán)重不良反應(yīng)。因此，在臨床中監(jiān)測這些藥物的血藥濃度對于結(jié)核病的治療意義重大。

此外，結(jié)核患者由于自身免疫力下降，會存在繼發(fā)感染的傾向，其中真菌感染是比較常見的類型之一。伏立康唑(Voriconazole)由于對各種真菌的耐藥率較低，在臨床上常被用于有效控制真菌的感染。然而一線抗結(jié)核藥物利福霉素，作為CYP酶強誘導(dǎo)劑，可以使伏立康唑穩(wěn)態(tài)血藥濃度顯著降低，其AUC甚至降低了95.5％。對于真菌感染的結(jié)核患者，在常規(guī)抗結(jié)核治療的同時需聯(lián)合使用伏立康唑，而伏立康唑在體內(nèi)需要維持一定的血藥濃度才能起到殺菌作用。因此，掌握其體內(nèi)血藥濃度就顯得尤為重要。

目前，上述藥物濃度測定多采用HPLC法，但該法易受內(nèi)源性物質(zhì)干擾，檢測下限較高，且每次只能測定一種藥物。但結(jié)核病的治療方案是多種藥物長期聯(lián)合應(yīng)用，HPLC法不能滿足該需求。開發(fā)一種可以同時檢測多種藥物濃度的方法，對于提高檢測效率，實現(xiàn)患者血樣的高通量檢測具有重要意義。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供同時測定血漿中6種一線抗結(jié)核藥物及抗真菌藥物伏立康唑血藥濃度的方法。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

第一方面，本發(fā)明實施例提供一種同時測定血漿中6種一線抗結(jié)核藥物及抗真菌藥物伏立康唑血藥濃度的方法，其包括：

所述6種一線抗結(jié)核藥物為異煙肼、利福平、利福噴丁、乙胺丁醇、吡嗪酰胺和左氧氟沙星，所述抗真菌藥物為伏立康唑；

將所述6種一線抗結(jié)核藥物和所述抗真菌藥物的對照品分別加甲醇溶解配制成7種不同梯度濃度的對照品溶液，隨后分別7種對照品溶液與內(nèi)標(biāo)對乙酰氨基酚儲備液混合后，加入蛋白沉淀劑沉淀，取上清液在高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用設(shè)備上進樣分析，以藥物濃度為橫坐標(biāo)，以藥物峰面積和內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，計算回歸方程作為標(biāo)準(zhǔn)曲線；

向臨床血漿樣本中加入內(nèi)標(biāo)對乙酰氨基酚儲備液，加入蛋白沉淀劑沉淀，取上清液在高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用設(shè)備上進樣分析，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算臨床血漿樣本中各藥物濃度；

液相色譜參數(shù)為：

流動相：流動相A為體積濃度為0.1-0.3％的醋酸水溶液，流動相B為甲醇和乙腈的混合溶液，采用梯度洗脫，洗脫程序為：