[發明專利]一種用馬來氏網結合高通量測序調查昆蟲多樣性的方法

有效

• 申請號: 202011177924.0
• 申請日: 2020-10-29
• 公開（公告）號: CN112293381B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 楊曉飛;曹權;胡安捷;莫育盆
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G16B30/00
• 分類號: G16B30/00;A01M1/20;A01M1/10
• 代理公司: 昆明合盛知識產權代理事務所(普通合伙) 53210
• 代理人: 龍燕

1.一種用馬來氏網結合高通量測序調查昆蟲多樣性的方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

(1)針對實施地點面積布點，每個樣點安放一個馬來氏網；在馬來氏網的收集瓶內裝3/4的無水乙醇，14天收集一次昆蟲；

(2)收集來的昆蟲編寫測序編號送去高通量測序；

(3)高通量測序數據處理：識別并剔除疑問序列，利用FLASH軟件進行質量檢驗；使用UPARSE軟件對序列配對連接及去除嵌合體，并按97％的序列相似度歸并和劃分OTU，將豐度值低于全體樣本測序總量0.001％的OTU去除，以得到處理后的OTU序列；

(4)使用QIIME軟件，對OTU豐度矩陣中每個樣本的序列總數在不同深度下隨機抽樣，以每個深度下抽取到的序列數及其對應的OTU數繪制稀疏曲線圖和各樣本的豐度等級曲線圖，以確定測序深度是否合理；

(5)在測序深度合理，可保證后續分析結果準確可靠的前提下，對各OTU所對應的序列進行NCBI Blast比對，從而對各OTU進行鑒定，即昆蟲鑒定；后使用QIIME軟件，分析各樣本在門、綱、目、科、屬五個分類水平上的組成和豐度分布情況，使用R軟件繪制成圖，以展示各分類水平上的昆蟲組成；

(6)通過Alpha多樣性分析、Beta多樣性分析，得到不同馬來氏網安放點昆蟲種群間的結構差異和多樣性，從而可進一步查閱文獻分析害蟲及其天敵的動態；

步驟(2)高通量測序PCR過程中，擴增基因選用線粒體DNAbarcoding片段；上游引物為mlCOIintF，上游引物序列：

GGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC；下游引物為HCO2198，下游引物序列：TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA；該基因片段能夠實現對各昆蟲物種的準確鑒定。