[發明專利]一種核酸提取方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202011175528.4
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112195177B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 孫佳瑞;王玲;任紅燕
• 申請（專利權）人: 上海慕柏生物醫學科技有限公司;孫佳瑞
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及核酸提取領域，特別是涉及一種核酸提取方法及試劑盒，所述試劑盒中包括：所述核酸化學裂解液、抑制成分去除液，所述核酸化學裂解液包括異硫氰酸胍、N?月桂酰肌氨酸鈉鹽、PBS，所述抑制成分去除液包括十二水合硫酸鋁銨溶液和交聯聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)的混合液以及乙酸銨。本發明的核酸提取方法包括采用所述核酸化學裂解液化學裂解樣本，再經雜質去除、核酸吸附、洗滌、洗脫后，收集得到核酸。本發明的方法充分考慮到核酸提取中的全面性和無偏向性，又考慮到核酸的純度，核酸完整性，以及減少過程中損失而確保濃度，也可針對不同類型的生物或環境樣本可形成嵌套，保障了提取方法的廣譜適用性。

技術領域

本發明涉及核酸提取領域，特別是涉及一種核酸提取方法及試劑盒。

背景技術

脫氧核糖核酸(DNA)是生物的主要遺傳物質。在分子生物學、生物化學等領域中，以 DNA為研究對象或目標的領域甚是廣泛。然而，從環境樣本(例如：土壤、水體、沙地等)和生物樣本(例如：排泄物、組織、體液等)中獲得DNA則是開展相關研究實驗操作的第一步。目前，從獲取DNA的手段大致可以分為如下幾類：基于傳統分子生物學手段利用醇類沉淀DNA；基于硅膠基質材料的柱吸附DNA；基于磁性材料表明的修飾基團(例如：羥基基團-OH和羧基基團-COOH)吸附DNA等。根據不同的DNA獲取手段，同時也興起了方便快捷的試劑盒，如利用硅膠基質材料進行DNA提取的離心柱DNA提取試劑盒，以及利用磁性材料及其表面修飾基團進行DNA提取的納米磁珠DNA提取試劑盒及其與之配套的自動化設備等。目前，使用這些方法或試劑盒進行DNA提取，具有樣品類型覆蓋面廣、廣譜適用性強，可以獲得完整性好，濃度、純度高的DNA溶液。

近些年來，隨著分子生物學技術的不斷發展和組學技術研究的開展，高通量測序技術已經得到了廣泛應用。DNA則是高通量測序技術中常用的“原料”之一。然而，高通量測序技術應用不斷地深入發現，DNA的提取不能僅基于獲取核酸片段的完整性、濃度、純凈度和獲取效率上，更應該考慮復雜環境及復雜生物樣本類型中核酸獲取的全面性，無偏向性問題。近年來，DNA提取帶來的結果差異已陸續報道：Theda等(Theda U P Bartolomaeus,etal. Quantifying technical confounders in microbiome studies,CardiovascularResearch,cvaa128, doi:10.1093/cvr/cvaa128(2020).)，采用不同提取方法針對心血管疾病隊列進行研究發現，使用不同提取方法得出的特定種屬細菌與心血管疾病的危險標志物的相關性不一致，進行宏基因組比較分析時要確保DNA提取方法一致；Costea等(Costea,P.I.,et al.Towards standards for human fecal sample processing in metagenomicstudies.Nat Biotechnol 35,1069-1076, doi:10.1038/nbt.3960(2017).)針對同一份糞便樣本，采用21種有代表性的DNA提取方法，并量化觀察到的微生物群落組成的差異；通過對不同DNA提取操作流程的對比，明確DNA 提取方法對宏基因組分析結果具有較大影響。一些組學研究中，也明確列出DNA提取的偏向性是開展這些組學研究時的一項劣勢或限制因素(Andreas Schwiertz.Microbiota of the human body-implications in health anddisease.Switzerland:Springer,doi:10.1007/978-3-319- 31248-4(2016):11-12.)。

由此可見，在現有方法優勢(完整性好，濃度、純度高)的基礎上，考慮樣本中DNA提取的全面性，無偏向性，建立一套DNA提取方法，可以盡可能完全獲取樣本中各類物種的DNA，為各類研究提供穩定的實驗結果。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種核酸提取方法及試劑盒，用于解決現有技術中的問題。