[發明專利]一種核酸提取方法及試劑盒

有效

• 申請號: 202011175528.4
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112195177B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 孫佳瑞;王玲;任紅燕
• 申請（專利權）人: 上海慕柏生物醫學科技有限公司;孫佳瑞
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種核酸提取試劑盒，其特征在于，所述核酸提取試劑盒中由以下組分組成：核酸化學裂解液、抑制成分去除液、蛋白質去除劑、結合緩沖液、蛋白洗滌液、離子洗滌液以及洗脫液；

所述核酸化學裂解液的配制原料包括終濃度為0.6~1.6M的異硫氰酸胍、終質量體積百分數為0.03~0.05%的N-月桂酰肌氨酸鈉鹽和pH緩沖液；

所述抑制成分去除液包括十二水合硫酸鋁銨和PVPP的混合液以及乙酸銨，其中所述乙酸銨的濃度為50mM~5M，乙酸銨的溶劑為水，以十二水合硫酸鋁銨溶液和PVPP混合液的總體積為基準，所述十二水硫酸鋁銨的終濃度為50mM~0.6M，十二水合硫酸鋁銨溶液和PVPP混合液的溶劑為水；

所述蛋白質去除劑為蛋白酶K常溫保存液，以蛋白酶K常溫保存液的總體積為基準，所述蛋白酶K常溫保存液包括以下組分：蛋白酶K 10~30mg/mL、三（羥甲基）氨基甲烷 5mM-50mM、氯化鈣 1mM~50mM、氯化鈉 10-500mM、終體積濃度為30~60%的甘油、終體積濃度為0.1~5%的吐溫20，所述蛋白質去除劑的溶劑為水；

以結合緩沖液的總體積為基準，所述結合緩沖液包括終濃度為2-6M的鹽酸胍、終濃度為10~100mM的Tris-base、終濃度為50mM~3M的乙酸鈉和終體積濃度為0.1~5%的Triton X-100，溶劑為水；

以不含乙醇的蛋白洗滌液的總體積為基準，所述蛋白洗滌液包括終濃度為0.5-6M的鹽酸胍、終濃度為10~100mM的Tris-base、終濃度為1~500mM的氯化鈉和乙醇，所述乙醇為無水乙醇，所述不含乙醇的蛋白洗滌液與無水乙醇的混合體積比為1:9~19:1，所述蛋白洗滌液的溶劑為水；

以不含乙醇的離子洗滌液的總體積為基準，所述離子洗滌液包括終濃度為10mM~5M的Tris-base、終濃度為5mM~2M的乙二胺四乙酸二鈉、終濃度為1N~6N的鹽酸、終體積濃度為0.5%~50%的Tween 20、乙醇，所述乙醇為無水乙醇，所述不含乙醇的離子洗滌液與無水乙醇的混合體積比為1:9~19:1，所述離子洗滌液的溶劑為水；

所述核酸為DNA。

2.根據權利要求1所述的核酸提取試劑盒，其特征在于，所述PVPP的粒徑為100~120μm。

3.一種核酸提取方法，其特征在于，所述核酸提取方法包括采用權利要求1所述的核酸提取試劑盒中的核酸化學裂解液化學裂解、60-95℃的高溫孵育裂解和物理擊打裂解三種方式相結合裂解樣本，再采用權利要求1所述試劑盒中的抑制成分去除液、權利要求1所述試劑盒中的蛋白質去除劑去除雜質、采用權利要求1所述試劑盒中的結合緩沖液使核酸離心柱吸附、采用權利要求1所述試劑盒中的蛋白洗滌液和離子洗滌液洗滌、洗脫后，收集得到核酸；所述核酸提取的樣本為生物或環境微生物樣本；所述核酸為DNA。