[發(fā)明專利]用于敲低PD1基因表達(dá)的microRNA及其嵌合抗原受體-T/NK細(xì)胞的構(gòu)建

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011173416.5
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112239759A
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高基民;魏成;趙愛;尹曉光;聶代邦;段德明;龍婧;熊華強
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶斯德姆生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 重慶千石專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50259
• 代理人: 冷奇峰

1.一種用于高效敲低PD1基因表達(dá)的microRNA，其特征在于，所述microRNA由SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列編碼而成。

2.一種重組載體，其特征在于，含有編碼權(quán)利要求1所述microRNA的核苷酸序列。

3.一種重組慢病毒，其特征在于，將權(quán)利要求2所述重組質(zhì)粒及輔助質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，得到所述重組慢病毒。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述重組慢病毒，其特征在于，所述慢病毒包裝所用宿主細(xì)胞為293T細(xì)胞。

5.一種嵌合抗原受體-T/NK細(xì)胞，其特征在于，所述編碼嵌合抗原受體結(jié)構(gòu)包括第一信號、第二信號和第三信號；所述第一信號為抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，所述第二信號為跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，所述第三信號為權(quán)利要求1所述的microRNA，且所述microRNA插入在EF1α啟動子內(nèi)。

6.如權(quán)利要求5所述嵌合抗原受體-T/NK細(xì)胞的構(gòu)建方法，其特征在于，將權(quán)利要求4所述重組慢病毒轉(zhuǎn)染陽性T/NK淋巴細(xì)胞，培養(yǎng)后收獲細(xì)胞，從而制得所述能敲低內(nèi)源性PD-1表達(dá)的嵌合抗原受體-T/NK細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述構(gòu)建方法，其特征在于，所述陽性T/NK細(xì)胞是從人源外周血單個核細(xì)胞中分離獲得。

8.一種T/NK殺傷效應(yīng)細(xì)胞，其特征在于，其有效成分為權(quán)利要求3所述嵌合抗原受體-T/NK細(xì)胞。

9.權(quán)利要求8所述T/NK殺傷效應(yīng)細(xì)胞在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。