[發明專利]一種基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒在審
| 申請號： | 202011173184.3 | 申請日： | 2020-10-28 |
| 公開（公告）號： | CN112481396A | 公開（公告）日： | 2021-03-12 |
| 發明（設計）人： | 高芳;肖艷文;徐行勇 | 申請（專利權）人： | 廣州迪澳生物科技有限公司;廣州迪澳醫療科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6858;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/32 |
| 代理公司： | 廣州正明知識產權代理事務所(普通合伙) 44572 | 代理人： | 張麗 |
| 地址： | 510000 廣東省廣州市高新技術產業開*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 恒溫 檢測 結核 分枝桿菌 利福平 耐藥 試劑盒 | ||
1.一種用于結核分枝桿菌ropB基因環介導恒溫擴增的檢測引物組，其特征在于，所述檢測引物組包括外引物對F3/B3、內引物組FIP-1/FIP-2/FIP-3/FIP-4/BIP、環引物LB；其中，F3/B3的序列如SEQ ID NO：1～2所示，FIP-1/FIP-2/FIP-3/FIP-4/BIP的序列如SEQ IDNO：3～7所示；LB的序列如SEQ ID NO：8所示。
2.一種用于篩查ropB突變區域的分子信標，其特征在于，所述分子信標的序列如SEQID NO：9～12所示。
3.一種基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的檢測引物組和權利要求2所述的分子信標。
4.根據權利要求3所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，還包括反應液、DNA聚合酶、陽性對照和陰性對照。
5.根據權利要求4所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，所述反應液包含10mM dNTPs、10×ThermoPol反應緩沖液和100mM MgSO4水溶液，三者的體積比是7：5：3。
6.根據權利要求4所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照為含有ropB基因DNA片段的T載體克隆，所述陰性對照為超純水。
7.根據權利要求4所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，PCR擴增程序為：
第一步：63℃反應30s；
第二步擴增循環：63℃反應15s，63℃反應45s，采集熒光信號，45個循環。
8.根據權利要求4所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，所述檢測引物組、分子信標和反應液混合形成反應混合試劑。
9.根據權利要求8所述的基于恒溫法檢測結核分枝桿菌利福平耐藥的試劑盒，其特征在于，所述檢測引物組、分子信標和反應液的混合體積比為1：1：20。
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