[發明專利]一種用于細胞誘導自組織成多細胞球的3D凝膠載體及多細胞球培養方法

在審

• 申請號: 202011172644.0
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112522199A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 李冬冬;訾紅彥;戴仕奎;周飛
• 申請（專利權）人: 南京英瀚斯生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C08J3/24;C08L71/02;C08L89/00
• 代理公司: 南京蘇創專利代理事務所(普通合伙) 32273
• 代理人: 王華

1.一種用于細胞誘導自組織成多細胞球的3D凝膠載體，其特征在于通過以下方法制備獲得：

首先，將交聯劑BIS、抗細胞粘附組分A和促細胞粘附組分B，加入PBS溶液中，然后加入交聯引發劑，在振蕩或攪拌條件下水浴加熱至50-60℃完全溶解得到水凝膠溶液；

然后，將水凝膠溶液注入透明模具中，控制溫度在20-35℃，進行波長為405nm的光照，發生固化反應得到3D凝膠；

最后，將得到3D凝膠浸入PBS溶液中，并通過環氧乙烷進行滅菌處理，備用；其中，所述抗細胞粘附組分為PEGDA、丙烯酰胺或聚乙烯醇；所述促細胞粘附組分為GelMA、丙烯酰氨基膠原、丙烯酰氨基纖維蛋白原。

2.根據權利要求1所述用于細胞誘導自組織成多細胞球的3D凝膠載體，其特征在于：所述交聯引發劑為LAP。

3.一種結直腸癌細胞LOVO的多細胞球培養方法，將結直腸癌細胞LOVO以0.1-0.2X10⁶的密度接種在權利要求1或2所述3D凝膠載體的表面，并置于培養液中，在溫度為37±2℃，4-5％二氧化碳濃度的環境下進行培養，每兩天更換一次培養液，培養至少7天后，完成多細胞球結構培養；其中，在制備3D凝膠載體過程中，水凝膠溶液中添加的PEGDA、GelMA和交聯劑BIS的質量比分別為10％、10％、0.5％。

4.一種胃癌細胞SGC7901多細胞球培養方法，將胃癌細胞SGC7901以0.1-0.2X10⁶的密度接種在權利要求1或2所述3D凝膠載體的表面，并置于培養液中，在溫度為37±2℃，4-5％二氧化碳濃度的環境下進行培養，每兩天更換一次培養液，培養至少7天后，完成多細胞球結構培養；其中，在制備3D凝膠載體過程中，水凝膠溶液中添加的PEGDA、GelMA和交聯劑BIS的質量比分別為10％、15％、0.5％。

5.一種卵巢癌細胞SKOV3多細胞球培養方法，將卵巢癌細胞SKOV3以0.1-0.2X10⁶的密度接種在權利要求1或2所述3D凝膠載體的表面，并置于培養液中，在溫度為37±2℃，4-5％二氧化碳濃度的環境下進行培養，每兩天更換一次培養液，培養至少7天后，完成多細胞球結構培養；其中，在制備3D凝膠載體過程中，水凝膠溶液中添加的PEGDA、GelMA和交聯劑BIS的質量比分別為10％、5％、0.5％。

6.一種乳腺癌細胞MCF-7多細胞球培養方法，將乳腺癌細胞MCF-7以0.1-0.2X10⁶的密度接種在權利要求1或2所述3D凝膠載體的表面，并置于培養液中，在溫度為37±2℃，4-5％二氧化碳濃度的環境下進行培養，每兩天更換一次培養液，培養至少7天后，完成多細胞球結構培養；其中，在制備3D凝膠載體過程中，水凝膠溶液中添加的PEGDA、GelMA和交聯劑BIS的質量比分別為10％、20％、0.5％。