[發明專利]一種驗證內生共生菌的方法

在審

• 申請號: 202011172513.2
• 申請日: 2020-10-28
• 公開（公告）號: CN112352640A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 道仁圖雅;李燕;王琦;孟俊紅;梅汝鴻
• 申請（專利權）人: 錢康（北京）科技有限公司
• 主分類號: A01G22/22
• 分類號: A01G22/22;A01G7/06;A01G7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種驗證內生共生菌的方法，包括如下步驟：S1：驗證內生共生菌的裝置；基礎裝置：由玻璃廣口瓶，上有玻璃鐘罩，玻璃廣口瓶，瓶口置放塑料瓶塞，備用材料：可嚴密封閉廣口瓶瓶口的凡士林等物質；用于鐘罩內抽氣的干燥機。本發明微生物是來自生物體自然生態系而非土壤微生物范疇，供試微生物是經過多種生物、物理、化學方法進行標志，完全排除一般放射性干擾、抗生素標志，以及基因標志可能產生的污染、飄移等干擾，證明供試微生物完全自然地在生物體內定植、繁殖、轉移，利用放射物質標注微生物，該微生物同時培育對兩種以上抗生菌素具有拮抗性能，驗證生物體內內生共生菌存在。

技術領域

本發明涉及植物病理學技術領域，尤其是涉及一種驗證內生共生菌的方法。

背景技術

在植物病理學中“內生”(endobiotic)是專業名詞，指病原菌是植物體內的內生菌。某些病原菌同植物體內建立“共生”關系(symbiotic)，內生共生沒有直接試驗證明。

生物個體是個體細胞、組織和體內微生物組成的。這些微生物可以分為環境微生物、內生微生物、內生共生微生物。目前傳統方式無法很好的證明某些微生物可以在植物體內定植、繁殖、轉移的內生共生的技術，因此驗證生物體內內生共生菌存在極為重要。

為此，提出一種驗證內生共生菌的方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種驗證內生共生菌的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種驗證內生共生菌的方法，包括如下步驟：

S1：驗證內生共生菌的裝置；

基礎裝置：由玻璃廣口瓶，上有玻璃鐘罩，玻璃廣口瓶，瓶口置放塑料瓶塞；

備用材料：可嚴密封閉廣口瓶瓶口的凡士林等物質；用于鐘罩內抽氣的干燥機。

S2：培育無菌的水稻菌；

將水稻種籽進行沖洗，然后用無菌水清洗三次；

S3：供試菌株進行放射雙抗處理：將供試菌株用鈷60放射處理，將供試菌株在抗生素鏈霉素利福平中，從低濃度逐漸培育成抗兩種抗菌素濃度達200ppm；

S4：將無菌稻苗置放在經過消毒的廣口瓶內，將含有營養液的供試放射標志抗兩種抗菌素的芽孢桿菌加在廣口瓶內，營養菌液溢過水稻根部；

S5：將供試廣口瓶瓶口嚴密密閉，避免出現水膜存在，避免廣口瓶內的芽孢桿菌絕從下部通過莖桿表面通過瓶塞傳到瓶塞上部；

S6：瓶塞上部鐘罩內，進行抽氣干燥，不允許上部莖葉有任何水膜存在，不允許有任何供試菌在莖葉表面有水膜存在；

S7：五天后，在供試水稻苗頂端葉尖上可檢查供試芽孢桿菌。

(1)放射雙抗芽孢桿菌共有鈷60放射標志并且在200ppm鏈霉素利福平兩種抗生素培養的試劑上生長；

(2)本試驗設將供應菌殺死后，做對照。對照在上部葉尖處沒有放射性標志，并抗兩種抗素菌的芽孢桿菌。

優選的，在所述S2步驟中，清洗后的水稻種籽置放無菌營養液中室溫培養成苗，備用。

優選的，在所述S3步驟中供試菌株是芽孢桿菌。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明微生物是來自生物體自然生態系而非土壤微生物范疇，供試微生物是經過多種生物、物理、化學方法進行標志，完全排除一般放射性干擾、抗生素標志，以及基因標志可能產生的污染、飄移等干擾，證明供試微生物完全自然地在生物體內定植、繁殖、轉移，利用放射物質標注微生物，該微生物同時培育對兩種以上抗生菌素具有拮抗性能，驗證生物體內內生共生菌存在。